[發明專利]一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法

在審

• 申請號: 201710966593.0
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107764965A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 李紅巖;李羅英;于志勇;李潔;鄭蓓
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: G01N33/18
• 分類號: G01N33/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于通過選擇使用TGA溶液對菌株進行復蘇后，直接在微孔板中進行毒性物質的暴露，實驗中合并前培養和復蘇過程，縮短實驗時間，簡化實驗流程，降低實驗成本。

2.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于S.typhimuriumTA1535/pSK1002菌株保存方式為-20℃菌株10倍稀釋后于37℃培養15.5h后，與DMSO以9:1的比例混合均勻，分裝1.5mL塑料管，于-20℃保存，上述條件下保存60天均可用于飲用水中復合污染物生物遺傳毒性測定，采用-20℃保存的菌株，降低了保存難度，節約了實驗開支，提高了實驗靈敏度和穩定性，有利于技術的廣泛推廣。

3.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于復蘇菌液采用TGA溶液。

4.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其所述的100μL4-NQO標準毒物溶液在微孔中的濃度分別為：0mg·L^-1、0.02mg·L^-1、0.039mg·L^-1、0.078mg·L^-1、0.156mg·L^-1、0.313mg·L^-1、0.625mg·L^-1、1.25mg·L^-1。

5.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于取2μL于98μL菌液中進行毒性物質暴露，上述毒性物質與菌液最佳配比提高了實驗靈敏度，降低了檢測限。

6.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于吸取暴露后菌液10μL于50μL BugBuster溶液中，反應10min，實驗中采用BugBuster蛋白質提取劑取代多種化學試劑，不僅簡化實驗流程和操作步驟，而且提高實驗靈敏度和穩定性。

7.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于酶促反應的底物選擇CPRG為酶促反應底物，采用CPRG溶液，提高整個檢測過程的靈敏度和菌液對標準毒物的陽性響應值，有利于提高實驗數據的準確性和可靠度。

8.根據權利要求1所述的一種飲用水中復合污染物生物遺傳毒性快速、高通量檢測的方法，其特征在于毒性暴露過程是在96孔板中進行的，還適用于384孔板。