[發(fā)明專(zhuān)利]一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的誘導(dǎo)制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710966385.0
• 申請(qǐng)日: 2017-10-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107646683B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁麗娜;呂彥迪;曾玉蘭;蘇小俊;許園園;劉哲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 李靜

本發(fā)明涉及一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的誘導(dǎo)制備方法，取蕪菁蘿卜屬間遠(yuǎn)緣雙單倍體雜種無(wú)性苗的幼芽接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到擴(kuò)繁的無(wú)性幼芽；取幼芽接種于含0.02wt％秋水仙堿的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到誘導(dǎo)后的幼芽；將誘導(dǎo)后的幼芽轉(zhuǎn)入到分化培養(yǎng)基中進(jìn)行后繼培養(yǎng)，得到幼苗；對(duì)幼苗的幼嫩葉片進(jìn)行流式細(xì)胞儀倍性分析，以蕪菁蘿卜雙單倍體雜種的二倍體母本蕪菁、父本蘿卜，以及經(jīng)過(guò)細(xì)胞學(xué)鑒定的蕪菁蘿卜雙單倍體雜種為對(duì)照，峰值與對(duì)照相近的為二倍體，出現(xiàn)顯著單個(gè)高峰的為整倍體，出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)高度相近分離峰的為混倍體。該方法操作方便，倍性鑒定效率高，解決了現(xiàn)有技術(shù)中蕪菁蘿卜屬間雙單倍體雜種不育，無(wú)法進(jìn)行遺傳和育種利用的問(wèn)題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的誘導(dǎo)制備方法，屬于植物的多倍體育種領(lǐng)域。

背景技術(shù)

蕪菁是十字花科蕓薹屬蕓薹種蕪菁亞種，肥大肉質(zhì)根供食用，肉質(zhì)根柔嫩、致密，供炒食、煮食。對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性很強(qiáng)，產(chǎn)量較高，是具有較長(zhǎng)食用歷史的傳統(tǒng)蔬菜之一。蘿卜原產(chǎn)于我國(guó)，是十字花科蘿卜屬，以肉質(zhì)根供食用，是主要的根莖類(lèi)蔬菜之一，其營(yíng)養(yǎng)豐富、管理簡(jiǎn)便、產(chǎn)量高、成本低，供應(yīng)期長(zhǎng)，產(chǎn)品耐貯運(yùn)，用途廣，不僅可以食用，還可加工，并且具有較高的食療作用。以蕪菁為母本，蘿卜為父本創(chuàng)制的異源屬間雙單倍體，由于在減數(shù)分裂過(guò)程中染色體不能正常的配對(duì)和分離，遠(yuǎn)緣雜種往往表現(xiàn)高度不育；限制了其進(jìn)一步的改良和育種利用。

異源多倍體育種是植物創(chuàng)新育種的一種手段，通過(guò)染色體加倍技術(shù)，人工創(chuàng)造多倍體，是獲得高生物質(zhì)產(chǎn)量植物新品種的有效途徑之一。已有研究表明，秋水仙素可應(yīng)用于蕓薹屬植物的染色體加倍中，但在遠(yuǎn)緣雜交過(guò)程中利用秋水仙堿誘導(dǎo)染色體加倍仍然存在瓶頸現(xiàn)象，而且針對(duì)不同材料，采用不同的處理方式進(jìn)行秋水仙堿誘導(dǎo)染色體加倍的具體效果不同。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中蕪菁蘿卜屬間雙單倍體雜種不育，無(wú)法進(jìn)行遺傳和育種利用的問(wèn)題，提供一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的誘導(dǎo)制備方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的還在于提供一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的倍性鑒定方法。

技術(shù)方案

一種蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的誘導(dǎo)制備方法，包括如下步驟：

(1)取蕪菁蘿卜屬間遠(yuǎn)緣雙單倍體雜種無(wú)性苗的幼芽接種于培養(yǎng)基中，培養(yǎng)15-30d，得到擴(kuò)繁的蕪菁蘿卜屬間遠(yuǎn)緣雙單倍體無(wú)性幼芽；

(2)將經(jīng)過(guò)擴(kuò)繁的蕪菁蘿卜屬間遠(yuǎn)緣雙單倍體無(wú)性幼芽，接種于含0.02wt％秋水仙堿的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18-36小時(shí)后，得到誘導(dǎo)后的幼芽；

(3)將誘導(dǎo)后的幼芽轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中進(jìn)行后繼培養(yǎng)，得到幼苗；

(4)取后繼培養(yǎng)后的幼苗的幼嫩葉片進(jìn)行流式細(xì)胞儀倍性分析，以蕪菁蘿卜雙單倍體雜種的二倍體母本蕪菁、父本蘿卜，以及經(jīng)過(guò)細(xì)胞學(xué)鑒定的蕪菁蘿卜雙單倍體雜種為對(duì)照，峰值與對(duì)照相近的為二倍體，出現(xiàn)顯著單個(gè)高峰的為整倍體，出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)高度相近分離峰的為混倍體。

步驟(1)中，所述培養(yǎng)基的配方為：MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+2％蔗糖+0.7％瓊脂。

步驟(2)中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：0.02wt％秋水仙堿+MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2％蔗糖+0.7％瓊脂。

步驟(3)中，所述分化培養(yǎng)基的配方為：MS+1mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2％蔗糖+0.7％瓊脂。

步驟(3)中，所述后繼培養(yǎng)的時(shí)長(zhǎng)為20-35d，溫度為25℃，光照時(shí)間16h/d，光照強(qiáng)度為2000lx。

上述方法制得的蕪菁蘿卜屬間異源多倍體的倍性鑒定方法，包括如下步驟：