[發明專利]一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201710964748.7
• 申請日: 2017-10-17
• 公開（公告）號: CN107817303A
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發明（設計）人: 葉松;郭晴;王祥河;王婷;曹琳琳
• 申請（專利權）人: 天津實發中科百奧工業生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司12209
• 代理人: 劉玲

1.一種蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)腺苷標準溶液配制：

稱量腺苷標準品，用腺苷提取液溶解并定容，形成腺苷母液，用該腺苷母液配制成濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的腺苷標準溶液，備用；

2)樣品溶液配制：

稱取蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉樣品0.5g，加入5mL腺苷提取液溶解混勻，加入50mg石英砂并研磨至糊狀，冷卻后轉移至25mL比色管中并加腺苷提取液定容，用超聲波振蕩器超聲振蕩混合，在-20℃環境下冷凍再融化，反復凍融操作兩次后冷卻并轉移至離心機中離心處理，取上清液經0.45um濾膜過濾，制成樣品溶液，備用；

3)高效液相色譜法檢測分析：

將上述腺苷標準溶液與樣品溶液分別注入到液相色譜儀中進行液相色譜分析，以腺苷標準溶液的峰面積A為縱坐標，腺苷標準溶液濃度C為橫坐標得到腺苷標準曲線A＝69117C+348.01，將相同時間內樣品溶液的峰面積A’帶入到腺苷標準曲線中，得到樣品溶液中的腺苷含量C’，再根據樣品溶液中腺苷含量計算得出蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉樣品中的腺苷質量分數。

2.根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：步驟3)中所述腺苷質量分數w采用如下公式進行計算：

w＝(0.25C’/m)*100％

其中：C’為樣品溶液中的腺苷含量，單位為mg/mL；

m為蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉樣品的質量，單位為g。

3.根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：所述的液相色譜條件為：

色譜柱：Waters Symmetry C185μm4.6×150mm；

流動相：有機相為甲醇，水相為超純水；

流速：1mL/min；

柱溫：25℃；

進樣量：20μL；

檢測器采用紫外線檢測器。

4.根據權利要求3所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：所述流動相的洗脫條件為單一流動相洗脫：甲醇：水＝10：90，洗脫時間12min。

5.根據權利要求3所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：所述紫外線檢測器的檢測波長為254nm。

6.根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：所述步驟2)中腺苷提取液是質量分數為15％的甲醇溶液。

7.根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：在步驟2)中超聲振蕩的參數為：溫度65℃，頻率45KHZ，功率100W，超聲振蕩時間1h。

8.根據權利要求1所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：步驟2)中離心機轉速為3000r/min，離心5min。

9.根據權利要求3所述的蝙蝠蛾擬青霉菌絲粉中腺苷含量的快速檢測方法，其特征在于：所述的超純水符合《GB/T 6682-2008分析實驗室用水規格和試驗方法》中一級水的要求。