[發(fā)明專(zhuān)利]一種羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710963846.9
• 申請(qǐng)日: 2017-10-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108576218A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 舒國(guó)偉;上官文菲;田夢(mèng)琪;陳合
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A23C9/12
• 分類(lèi)號(hào): A23C9/12;C12N1/20;C12N9/52;C12R1/225
• 代理公司: 西安智大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61215
• 代理人: 張震國(guó)

1.一種羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：

1)羅伊式乳桿菌增菌培養(yǎng)基制備：

將葡萄糖15-25g、酵母浸粉15-25g、硫酸錳0.02-0.05g、吐溫80 0.5-1.0mL，菊糖1.5-2.5g、酪蛋白胨4-6g、磷酸氫二鈉4-6g、亮氨酸15-20mg添加到純凈水中，定容至1L，調(diào)節(jié)pH值至5.5-7.0，于121℃下滅菌得羅伊式乳桿菌增菌培養(yǎng)基；

2)羅伊式乳桿菌培養(yǎng)及菌體收集：

將羅伊式乳桿菌按2％-5％的接種量接入羅伊式乳桿菌增菌培養(yǎng)基中，35-41℃恒溫培養(yǎng)18-24h，然后離心倒掉上清液，收集菌體沉淀，之后用無(wú)菌生理鹽水洗滌后離心得羅伊式乳桿菌菌泥；

3)羅伊式乳桿菌胞壁蛋白酶制備：

按每g羅伊式乳桿菌菌泥中添加20-30mL的磷酸緩沖液，35-45℃保溫1-2h后離心得上清液即為胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超濾去除小分子物質(zhì)，然后在保留液中添加CaCl₂，控制CaCl₂的濃度為8-15mM，最后通過(guò)冷凍干燥獲得羅伊式乳桿菌胞壁蛋白酶菌粉；

4)羊乳活性飲料的制備：

將鮮羊奶經(jīng)脫脂后調(diào)節(jié)pH值至6.0-8.0按質(zhì)量體積比向其中加入1-3％的羅伊式乳桿菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01-0.04％的CaCl₂，于35-45℃下酶解2-3h，然后再按質(zhì)量體積比添加0.5-1.0％的β-環(huán)糊精，0.2-0.4％的拐棗多糖、0.3-0.5％的低聚木糖、4-6％的赤蘚糖醇、3-5％的木糖醇、0.1-0.3％的L-蘋(píng)果酸，0.10-0.25％的檸檬酸，0.10-0.25％的檸檬酸鈉混合均勻后經(jīng)均質(zhì)、殺菌后即得到含降壓肽的羊乳活性飲料，其ACE抑制活性為75-88％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：所述步驟2)的離心是在4-10℃、6000-8000r/min下離心15-25min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：所述步驟3)的磷酸緩沖液的pH＝7.0，每升磷酸緩沖液中含180-210g氯化鋰、0.2-0.6g溶菌酶和3000-5000U變?nèi)芫亍?/p>

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：所述步驟3)的離心是在4-10℃、4000-6000r/min下離心20-30min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：所述步驟4)的均質(zhì)為溫度為15-30℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羅伊式乳桿菌蛋白酶制備含降壓肽羊乳活性飲料的方法，其特征在于：所述步驟4)的拐棗多糖制備過(guò)程為：取新鮮拐棗經(jīng)洗凈后進(jìn)行打漿，然后加入20倍拐棗重量的水，攪拌均勻，于90℃條件下保溫2h，然后抽濾獲得拐棗多糖提取液，冷卻至38℃后按質(zhì)量體積比接入2％的保拉迪酵母活化液，37℃恒溫培養(yǎng)24h除去拐棗中的單糖和雙糖，離心收集保拉迪酵母菌體，將上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1/20，再按1:3的體積比加入無(wú)水乙醇，然后用布氏漏斗抽濾獲得拐棗粗多糖，再將拐棗粗多糖復(fù)水加入氯仿和正丁醇除蛋白，然后取水相再次加入氯仿和正丁醇，三次脫蛋白后通過(guò)冷凍干燥獲得拐棗多糖。