[發(fā)明專利]利用尖鐮孢霉菌發(fā)酵生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710959526.6
• 申請(qǐng)日: 2017-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN107523559B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴立忠;李謙;張延梅;沈曉鴻
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏金維制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/16
• 分類號(hào): C12N9/16;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及一種利用尖鐮孢霉菌生產(chǎn)D?泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基，包括種子培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中使用了植酸，提高菌種活力，促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)和代謝，提高種子液質(zhì)量，提高發(fā)酵產(chǎn)酶能力；發(fā)酵培養(yǎng)基中使用了糠醛，有利于誘導(dǎo)發(fā)酵產(chǎn)生D?泛解酸內(nèi)酯水解酶，提高發(fā)酵生。采用本發(fā)明的培養(yǎng)基發(fā)酵生物量≥7.8g/L干菌絲體，同國(guó)內(nèi)技術(shù)相比，發(fā)酵生物量提高8.3%以上;生產(chǎn)D?泛解酸內(nèi)酯水解酶活力達(dá)到1.29u/g（菌絲干燥體）以上，同國(guó)內(nèi)技術(shù)相比，酶活力提高了30%以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用尖鐮孢霉菌（ fusarum oxysporm ）發(fā)酵生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

D-泛酸鈣，也稱VB5，化學(xué)名稱D-N-(2，4-二羥基-3，3-二甲基丁酰基)-β-氨基丙酸鈣），相對(duì)分子量：476.54。泛酸鈣可以分為DL-型（混旋體）、D-型（右旋體）、L-型（左旋體）三種型式，其中，只有D-型（右旋體）具有生物活性。D-泛酸鈣進(jìn)入人體釋放出鈣元素和泛酸，而泛酸是輔酶A前體物質(zhì)，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為輔酶A而產(chǎn)生生理作用，參與碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝作用，是人體和動(dòng)物維持正常生理機(jī)能不可缺少的微量物質(zhì)。主要用于醫(yī)藥、食品及飼料添加劑。

根據(jù)D-泛酸鈣具有手性特征，現(xiàn)行制備D-泛酸鈣的技術(shù)，主要有兩種:第一種是化學(xué)合成法，即將β-氨基丙酸鈣和DL-泛解酸內(nèi)酯直接進(jìn)行合成反應(yīng)，再根據(jù)泛酸鈣混旋體溶解度比D-泛酸鈣和L-泛酸鈣大的特性，采用晶種誘導(dǎo)法結(jié)晶，將D-泛酸鈣和L-泛酸鈣分別析出，所得L-泛酸鈣經(jīng)堿催化消旋，反復(fù)拆分轉(zhuǎn)化為D-泛酸鈣。第二種是生物發(fā)酵法，即采用尖鐮孢霉菌（ fusarum oxysporm ）等微生物生物發(fā)酵產(chǎn)生D-泛解酸內(nèi)酯水解酶（存在菌絲體中），將這種酶作催化劑加入到DL-泛解酸內(nèi)酯液中，選擇性地不對(duì)稱水解DL-泛解酸內(nèi)酯中的D-泛解酸內(nèi)酯，將DL-泛解酸內(nèi)酯拆分成 D-泛解酸和L-泛解酸內(nèi)酯，分離后的 D-泛解酸，經(jīng)內(nèi)酯化處理，得到 D-泛解酸內(nèi)酯，再與β-氨基丙酸鈣反應(yīng)，合成D-泛酸鈣。

上述生物發(fā)酵法以其所具有的生產(chǎn)成本低、毒性小、污染少等特點(diǎn)，成為現(xiàn)今VB5工業(yè)化生產(chǎn)的主要發(fā)展方向。

目前，國(guó)內(nèi)采用尖鐮孢霉菌二級(jí)發(fā)酵生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶，存在的主要問(wèn)題有以下幾點(diǎn)：

1發(fā)酵原材料成本高。一般D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基中，氮源物質(zhì)需加入蛋白胨、酪蛋白，這類原材料價(jià)格較高，導(dǎo)致生產(chǎn)成本增加。

2 傳統(tǒng)酶產(chǎn)生培養(yǎng)基處方中，缺少適宜酶合成的誘導(dǎo)物以及產(chǎn)酶促進(jìn)劑，使得發(fā)酵生物量較低，一般在7.2g干菌絲體/L發(fā)酵液左右；酶活力不高，一般在1.0U/g干菌絲體左右。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高發(fā)酵生物量，增強(qiáng)酶活力，降低生產(chǎn)成本的利用尖鐮孢霉菌生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基。

為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：

1、一種利用尖鐮孢霉菌生產(chǎn)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶的培養(yǎng)基，其特征在于包括種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其中

所述種子培養(yǎng)基組成為：甘油10～16g/L、玉米蛋白粉12～15g/L、玉米漿3～5g/L、酵母浸粉6～8g/L、玉米粉20～24 g/L、葡萄糖20～23g/L、(NH₄)₂SO₄ 9～12g/L、輕質(zhì)碳酸鈣6～9g/L、植酸0.06～0.12g/L；