[發明專利]一種提高硫酸新霉素生產質量的方法

有效

• 申請號: 201710959459.8
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN107557413B
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 徐珍;劉聰潔;林青
• 申請（專利權）人: 河北圣雪大成制藥有限責任公司
• 主分類號: C12P19/52
• 分類號: C12P19/52;C12N1/20;C12R1/54
• 代理公司: 13115 石家莊元匯專利代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 李彤曉

一種提高硫酸新霉素生產質量的方法，本發明屬于新霉素的技術領域，包括斜面培養、種子培養和發酵培養，在發酵培養的過程中采用流加或一次性頓補的方式加入酵母粉和/或半胱氨酸和/或S?腺苷?L?蛋氨酸和/或硫酸銨和/或硫酸亞鐵和/或硫酸鎂和/或硫酸錳，流加或一次性頓補時機為發酵100h時開始，流加速率為每升發酵液流加0.01L/h，一次性頓補用量與流加的總量相同。本發明方法操作簡單，整個工藝過程穩定，放罐后發酵液中各有關物質的含量分別為新霉素B≥80％，新霉素C≤15％。

技術領域

本發明屬于新霉素的技術領域，涉及新霉素的制備方法，具體涉及一種提高硫酸新霉素生產質量的方法。本發明方法操作簡單，整個工藝過程穩定，放罐后發酵液中各有關物質的含量分別為新霉素B≥80％，新霉素C≤15％。

背景技術

新霉素是由弗氏鏈霉菌(Streptomyces fradiae)發酵產生的一種氨基糖苷類抗生素，其主要成分有新霉素A、新霉素B、新霉素C三種。其中以新霉素B為主要有效成分，新霉素C為次要成分，新霉素A為雜質。其中新霉素B和新霉素C二者互為立體異構體，新霉素B的抗菌活性是新霉素C的60倍，新霉素C幾乎無抗菌活性，但其毒性卻是新霉素B的300倍，因此，新霉素C被列為主要的受控雜質，產品質量中要求其含量越低越好。在新霉素的合成過程中，新霉素C的合成先于新霉素B的合成，新霉素C在NeoN異構酶的催化反應下發生異構化反應轉化為新霉素B，且此步反應不可逆，因此新霉素B合成的最后一步反應就是新霉素C的異構化反應。

目前生產新霉素的發酵液中新霉素B的含量一般在70-80％，新霉素C的含量一般在15-20％，其它部分是雜質。歐洲藥典中對硫酸新霉素有關物質的含量要求為C組分含量要低于15％，而C組分含量低于3％的硫酸新霉素產品可制備升級為另一種價格更高的藥品即硫酸弗拉菌素。因此，為滿足歐洲市場高端客戶對高質量新霉素的需求，相關生產廠家在這方面也做了很多工作。但目前生產中控制成品中新霉素C含量的方法是通過提取工藝中樹脂吸附、解吸等階段的控制來去除部分新霉素C，但由于新霉素B和新霉素C的結構非常相近，這些工藝同時也會將一部分有效成分新霉素B去除掉，因此成品收率會受到較大影響，且樹脂吸附解吸過程中需要對中間體有關物質的含量進行頻繁檢測，操作繁瑣，生產控制難度大，人力資源成本高。

發明內容

本發明為解決上述問題，通過發酵調控來促進新霉素B的合成，從根本上降低產品中新霉素C含量，即在發酵合成的過程中直接完成降低新霉素C含量，摒棄現有的提取工藝。通過提供一種發酵工藝控制來提高硫酸新霉素生產質量的方法，使得交付到提取車間的發酵液各種有關物質含量符合成品中有關物質含量的要求，從而規避現有提取生產工藝的缺陷和問題，提高產品收率，降低生產成本。

本發明為實現其目的采用的技術方案是：

一種提高硫酸新霉素生產質量的方法，包括斜面培養、種子培養和發酵培養，在發酵培養的過程中采用流加或一次性頓補的方式加入酵母粉和/或半胱氨酸和/或S-腺苷-L-蛋氨酸和/或硫酸銨和/或硫酸亞鐵和/或硫酸鎂和/或硫酸錳，流加時機為發酵100h時開始流加，流加速率為每升發酵液流加0.01L/h。

在發酵過程中流加或一次性頓補如下組分：按g/100mL水計，包括酵母粉0-20、半胱氨酸0-2、S-腺苷-L-蛋氨酸0-1、硫酸銨0-25、硫酸亞鐵0-0.03、硫酸鎂0-0.01、硫酸錳0-0.01，其中所有組分含量不同時為0。

一種提高硫酸新霉素生產質量的方法，包括以下步驟：

A斜面培養：將弗氏鏈霉菌接種至茄瓶斜面培養基內，在溫度28±1℃、濕度20-60％的恒溫室培養6-7天，得到成熟的斜面孢子；

B制備孢子液：取步驟A中的孢子斜面在無菌室內每瓶加入30-35個無菌玻璃珠，振搖，將孢子打下，然后加入無菌蒸餾水50-55mL，搖勻，放入已滅菌的空三角瓶中，在2-6℃冰箱中保存備用；