[發明專利]一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條及其應用

在審

• 申請號: 201710957730.4
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN109669039A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 潘瑞麗;黨芳芳;王蕊;孫露宏;付世騫;姜毓君;滿朝新
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

本發明公開了一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條及其應用，屬于阪崎克羅諾桿菌檢測技術領域。本發明增敏試紙條包括樣品墊，金標墊，NC膜，吸水墊和底板，其中：NC膜上設有檢測線和控制線，控制線上包被有羊抗鼠二抗，檢測線上包被的檢測線溶液是通過將膠體金與抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體進行孵育獲得的。本發明試紙條具有可提高NC膜上蛋白質結合量的特點，進而增強捕獲率，而且在檢測線處加入的膠體金可以提高聚集顯色，從而提高檢測效果，較傳統試紙條靈敏度提高了100倍，特異性強，檢測時間短，制作簡便且成本低，方便攜帶，適用于現場檢測阪崎克羅諾桿菌。

技術領域

本發明涉及一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條及其應用，屬于阪崎克羅諾桿菌檢測技術領域。

背景技術

阪崎克羅諾桿菌屬克羅諾桿菌屬，是一種重要的食源性致病菌，能夠引起嚴重的新生兒腦膜炎、壞死性小腸結腸炎和菌血病等。盡管由阪崎克羅諾桿菌引發的發病率非常低，但它的致死率可達80％，并且幸存的患者經常會留下嚴重的神經系統損傷后遺癥以及發育障礙。在多起阪崎克羅諾引起的疾病事件中調查發現，阪崎克羅諾感染與嬰幼兒配方奶粉存在密切的關系。因此建立一種快速高效檢測乳粉中阪崎克羅諾桿菌的方法尤為重要。

目前常用的傳統分離檢測方法，需要經過前增菌、選擇性培養、生理生化鑒定等，需5-7天才能確定目標菌種，耗時長、勞動量大。因此需要發展一種簡單快速、靈敏特異的方法來進行致病菌的檢測，迅速發展起來的PCR、LAMP、ELSA、生物傳感器、電化學等檢測方法，雖然具有較好的靈敏度和特異性，但是要求具有專業技能、程序繁瑣、還需要利用昂貴的實驗儀器，而且無法實現現場檢測。

近年來快速發展的傳統試紙條操作簡便、檢測快速、結果可直接肉眼判讀、不需大型儀器、便于攜帶，可用于現場檢測，已成為基層篩選的有效工具。然而由于傳統試紙條存在靈敏度低的問題，導致其廣泛應用受到了限制。現在提高膠體金試紙條靈敏度的方法多采用更換顏色標記物為新型標記物，如使用熒光微球、金磁復合材料、金磁復合結構，然而這些新型標記物制作繁瑣且需要一些精密的儀器，還有采用金增強、銀增強等方式提高靈敏度，但是這些方法在檢測完成后需引入額外的檢測程序、延長了檢測時間且用到的還原劑鹽酸羥胺、對苯二酚屬等有毒試劑。因此迫切需要提供一種簡便有效提高傳統試紙條檢測靈敏度的方法，實現簡便、快速檢測阪崎克羅諾桿菌。

發明內容

為解決現有傳統試紙條靈敏度低，且現有的提高靈敏度的方式繁瑣、復雜、耗時長，甚至需要引入額外試劑的問題，本發明提供了一種新型快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條，該試紙條相比于傳統試紙條顯著提高了靈敏度，并且不需要額外引入試劑，成本低，試紙條的制備方法簡單，能夠實現阪崎克羅諾桿菌的快速檢測，采用的技術方案如下：

本發明的目的在于提供一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條，所述增敏試紙條包括樣品墊，金標墊，NC膜，吸水墊和底板，其中：NC膜上設有檢測線和控制線，其特征在于，所述控制線上包被有羊抗鼠二抗；所述檢測線上包被的檢測線溶液是通過將膠體金與抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體進行孵育獲得的。

進一步地，所述檢測線溶液中膠體金的濃度為20PM-80PM，抗阪崎捕獲抗體的濃度為1.4mg/mL-2.6mg/mL。

更進一步地，所述檢測線溶液中膠體金濃度為60PM，抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體濃度為2.2mg/mL。

進一步地，所述孵育的溫度為4℃。

進一步地，所述孵育時間為1h。

進一步地，所述檢測線溶液中所用的膠體金是通過將膠體金溶液離心、然后用pH為9的10mM Tirs/HCl復溶獲得的。

更進一步地，所述檢測線溶液中所用的膠體金的制備方法是將每1ml膠體金溶液(35nm)在7000rpm下離心20min，去掉上清，然后用PH為9的10mM Tirs/HCl進行復溶。