[發明專利]一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條及其應用

在審

• 申請號: 201710957730.4
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN109669039A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 潘瑞麗;黨芳芳;王蕊;孫露宏;付世騫;姜毓君;滿朝新
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條，所述增敏試紙條包括樣品墊，金標墊，NC膜，吸水墊和底板，其中：NC膜上設有檢測線和控制線，其特征在于，所述控制線上包被有羊抗鼠二抗；所述檢測線上包被的檢測線溶液是通過將膠體金與抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體進行孵育獲得的。

2.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中膠體金的濃度為20PM-80PM，抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體的濃度為1.4mg/mL-2.6mg/mL。

3.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中膠體金濃度為60PM，抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體濃度為2.2mg/mL。

4.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述孵育的溫度為4℃；所述孵育時間為1h。

5.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中所用的膠體金是通過將膠體金溶液離心、然后用pH為9的10mM Tirs/HCl復溶獲得的。

6.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述膠體金的粒徑為35nm。

7.根據權利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述金標墊的制備方法為：每1mL膠體金溶液加入碳酸鉀調節溶液PH值后加入抗阪崎克羅諾桿菌檢測抗體10ug，混勻，室溫靜置反應1h以上后，加入封閉劑100uL 10％BSA，混勻，室溫靜置反應1h以上，離心后去掉上清，加150uL復溶液及2uL 10％BSA沉淀并混勻即得金標溶液，將金標溶液以15uL/cm的速度均勻涂在結合墊上，于37℃干燥1h即得金標墊。

8.權利要求1-7任一所述的增敏試紙條在檢測阪崎克羅諾桿菌中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，將100uL待檢測樣品滴加于權利要求1-7任一所述增敏試紙條的樣品墊上，15min后觀察檢測結果；檢測結果的判定方法為：若增敏試紙條的檢測線、控制線都出現紅色條帶，表明待檢測樣品中含有阪崎克羅諾桿菌，陽性結果；若檢測線未出現紅色條帶，控制線出現紅色條帶，表明待檢測樣品中不含有阪崎克羅諾桿菌，陰性結果；若控制線未出現紅色條帶，表明試紙條失效。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述待檢測樣品為乳粉時，其前處理方法為將10g乳粉溶解于90mL 0.85％生理鹽水中，5000rpm離心5min去掉上層奶皮、脂質層及上清，再次溶解于生理鹽水中，進行二次離心，去掉剩余的奶皮及脂質層，加入生理鹽水復溶，用于檢測。