[發(fā)明專利]一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710957730.4
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN109669039A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 潘瑞麗;黨芳芳;王蕊;孫露宏;付世騫;姜毓君;滿朝新
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種快速檢測阪崎克羅諾桿菌的增敏試紙條，所述增敏試紙條包括樣品墊，金標(biāo)墊，NC膜，吸水墊和底板，其中：NC膜上設(shè)有檢測線和控制線，其特征在于，所述控制線上包被有羊抗鼠二抗；所述檢測線上包被的檢測線溶液是通過將膠體金與抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體進行孵育獲得的。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中膠體金的濃度為20PM-80PM，抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體的濃度為1.4mg/mL-2.6mg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中膠體金濃度為60PM，抗阪崎克羅諾桿菌捕獲抗體濃度為2.2mg/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述孵育的溫度為4℃；所述孵育時間為1h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述檢測線溶液中所用的膠體金是通過將膠體金溶液離心、然后用pH為9的10mM Tirs/HCl復(fù)溶獲得的。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述膠體金的粒徑為35nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增敏試紙條，其特征在于，所述金標(biāo)墊的制備方法為：每1mL膠體金溶液加入碳酸鉀調(diào)節(jié)溶液PH值后加入抗阪崎克羅諾桿菌檢測抗體10ug，混勻，室溫靜置反應(yīng)1h以上后，加入封閉劑100uL 10％BSA，混勻，室溫靜置反應(yīng)1h以上，離心后去掉上清，加150uL復(fù)溶液及2uL 10％BSA沉淀并混勻即得金標(biāo)溶液，將金標(biāo)溶液以15uL/cm的速度均勻涂在結(jié)合墊上，于37℃干燥1h即得金標(biāo)墊。

8.權(quán)利要求1-7任一所述的增敏試紙條在檢測阪崎克羅諾桿菌中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，將100uL待檢測樣品滴加于權(quán)利要求1-7任一所述增敏試紙條的樣品墊上，15min后觀察檢測結(jié)果；檢測結(jié)果的判定方法為：若增敏試紙條的檢測線、控制線都出現(xiàn)紅色條帶，表明待檢測樣品中含有阪崎克羅諾桿菌，陽性結(jié)果；若檢測線未出現(xiàn)紅色條帶，控制線出現(xiàn)紅色條帶，表明待檢測樣品中不含有阪崎克羅諾桿菌，陰性結(jié)果；若控制線未出現(xiàn)紅色條帶，表明試紙條失效。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述待檢測樣品為乳粉時，其前處理方法為將10g乳粉溶解于90mL 0.85％生理鹽水中，5000rpm離心5min去掉上層奶皮、脂質(zhì)層及上清，再次溶解于生理鹽水中，進行二次離心，去掉剩余的奶皮及脂質(zhì)層，加入生理鹽水復(fù)溶，用于檢測。