[發明專利]一種制備獸用狂犬病疫苗的方法

在審

• 申請號: 201710957003.8
• 申請日: 2017-10-16
• 公開（公告）號: CN108144053A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 任紅濤;劉健鵬;鄒權
• 申請（專利權）人: 北京生科基因科技有限公司;榆林市動物疫病預防控制中心;墊江縣動物衛生監督所
• 主分類號: A61K39/205
• 分類號: A61K39/205;A61P31/14;C12N7/00;C12N5/071;C12R1/93
• 代理公司: 北京智沃律師事務所 11620
• 代理人: 王繼勝

本發明公開了一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，所述方法提出了利用細胞生物反應器全懸浮無血清的方式培養生產獸用狂犬病疫苗，具體為采用狂犬病毒株PV/BHK?21對通過利用細胞生物反應器進行全懸浮、無血清、連續灌流培養得到的一定密度的該病毒株適應的BHK?21細胞進行病毒感染，并進行多次病毒收獲；而后對收獲的病毒原液進行過濾系統處理和滅活，輔之以佐劑，制成免疫性高、安全性好的狂犬病滅活疫苗。利用細胞生物反應器全懸浮連續灌流培養，可實現高密度培養細胞，并可連續收獲病毒；利用無血清培養，可避免血清源性污染，簡化提純程序，降低血清引起的機體過敏性反應。利用本發明的方法可實現大批量生產推廣。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及一種利用細胞生物反應器進行全懸浮無血清的方式培養生產獸用狂犬病滅活疫苗的方法。

背景技術

狂犬病(Rabies)是人類認識較早的，由狂犬病毒(Rabies Virus)引起的一種人畜共患的中樞神經系統急性傳染病。狂犬病毒屬于核糖核酸型彈狀病毒，通過破損的皮膚或粘膜侵入人或動物機體，一旦感染發病，死亡率達100％。狂犬病是死亡率最高的傳染病，全世界每年約有5萬人左右死于狂犬病，其中90％在亞洲。目前，國內狂犬病發病人數比例仍很高，僅次于印度，屬于世界上狂犬病嚴重流行的國家之一。《中華人民共和國傳染病防治法》將狂犬病列為乙類傳染病。動物是狂犬病毒的主要攜帶者，目前世界上針對狂犬病沒有特別有效地治療方法，對動物進行狂犬病免疫接種是唯一的高效預防防御措施。

動物狂犬病預防疫苗包括弱毒苗和滅活苗。前期，弱毒疫苗在國內廣泛使用，但由于弱毒苗存在著毒力返祖及散毒的潛在危險，在發達國家和地區早已停止使用。世界衛生組織(WHO)和世界動物衛生組織(OIE)提倡使用狂犬病滅活疫苗來控制狂犬病。目前我國已基本采用狂犬病滅活疫苗。

國內狂犬病滅活疫苗的生產方法主要有轉瓶培養法和微載體懸浮培養法，兩種方法都存在著缺陷。轉瓶培養法生產的半成品抗原效價較低，需要濃縮，且勞動強度大，生產周期長，污染風險大。微載體懸浮培養法雖然能夠有效地增殖細胞，但微載體的使用成本高、且不易進行放大培養。目前，國內狂犬病疫苗生產中使用的是含血清培養基，由于添加的血清存在著不易純化、攜帶外源病毒、批次間質量不同等問題，造成生產的疫苗安全性差、質量不穩定，易誘發機體產生過敏性反應。自動化程度低、生產技術落后、病毒株抗原性差、生產細胞維持時間短、病毒產量低、疫苗潛在著過敏性反應、成產成本高等問題嚴重影響著我國狂犬病滅活疫苗的發展。因此一種安全、有效、自動化程度高、病毒抗原性好、產量高的生產方法是國內狂犬病滅活疫苗生產所需要的。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的問題之一。

本發明要解決的技術問題之一在于克服國內狂犬病滅活疫苗生產上的不足，為獸用狂犬病滅活疫苗的生產提供一種新型、安全、有效的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供一種制備獸用狂犬病疫苗的方法。

所述方法是利用細胞生物反應器全懸浮無血清的方式培養生產獸用狂犬病疫苗，具體包括如下步驟：

(1)利用細胞生物反應器對狂犬病毒株PV/BHK-21適應的BHK-21細胞進行全懸浮、無血清、連續灌流培養，至細胞密度達到2～4×10⁶cell/ml時，采用狂犬病毒株PV/BHK-21進行病毒感染，而后進行多次病毒收獲，至病毒滴度達10^7.5TCID50/ml；

(2)對步驟(1)中收獲的病毒原液進行過濾系統處理和滅活，輔之以佐劑，制成狂犬病滅活疫苗。