[發明專利]一種制備獸用狂犬病疫苗的方法在審
| 申請號： | 201710957003.8 | 申請日： | 2017-10-16 |
| 公開（公告）號： | CN108144053A | 公開（公告）日： | 2018-06-12 |
| 發明（設計）人： | 任紅濤;劉健鵬;鄒權 | 申請（專利權）人： | 北京生科基因科技有限公司;榆林市動物疫病預防控制中心;墊江縣動物衛生監督所 |
| 主分類號： | A61K39/205 | 分類號： | A61K39/205;A61P31/14;C12N7/00;C12N5/071;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京智沃律師事務所 11620 | 代理人： | 王繼勝 |
| 地址： | 100071 北京市豐*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞生物反應器 狂犬病疫苗 全懸浮 獸用 灌流培養 無血清 血清 制備 狂犬病滅活疫苗 病毒 高密度培養 過敏性反應 狂犬病毒株 無血清培養 細胞 病毒感染 病毒收獲 病毒原液 過濾系統 提純程序 免疫性 收獲 滅活 佐劑 生產 污染 | ||
1.一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述方法是利用細胞生物反應器全懸浮無血清的方式培養生產獸用狂犬病疫苗，具體包括如下步驟：
(1)利用細胞生物反應器對狂犬病毒株PV/BHK-21適應的BHK-21細胞進行全懸浮、無血清、連續灌流培養，至細胞密度達到2～4×106cell/ml時，采用狂犬病毒株PV/BHK-21進行病毒感染，而后進行多次病毒收獲，至病毒滴度達107.5TCID50/ml；
(2)對步驟(1)中收獲的病毒原液進行過濾系統處理和滅活，輔之以佐劑，制成狂犬病滅活疫苗。
2.根據權利要求1所述的一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述無血清培養基為DMEM(Gibico)，所述BHK-21細胞在細胞生物反應器中的培養條件為：細胞接種量為1.0～2×105cell/ml，細胞生物反應器轉速為50～80rpm，溶氧值為30～60％，pH值為7.0～7.4，灌流速度為1～3體積/天。
3.根據權利要求2所述的一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述采用狂犬病毒株PV/BHK-21對其適應的BHK-21細胞進行病毒感染這一步中，病毒接種量MOI為0.01～5，培養溫度為32～34℃，pH值為7.0～7.4，病毒收集時間為自病毒接種后，連續收獲6～12天。
4.根據權利要求1所述的一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述狂犬病毒滅活劑為β-丙內酯，其中：β-丙內酯：病毒液(V:V)為0.5～1.5：4000，滅活步驟為將β-丙內酯以上述比例加入病毒樣品，4℃過夜，再經37℃水浴水解2小時。
5.根據權利要求4所述的一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述β-丙內酯：病毒液(V:V)為1：4000。
6.根據權利要求1所述的一種制備獸用狂犬病疫苗的方法，其特征在于，所述佐劑為氫氧化鋁膠，終濃度為0.5～1mg/ml。
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