[發明專利]一種制備12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的方法

在審

• 申請號: 201710955862.3
• 申請日: 2017-10-15
• 公開（公告）號: CN109666714A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 楊金玲;朱平;梁會超;張婷婷;胡宗風;李燕
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院藥物研究所
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12N1/19;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84
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本發明涉及糖基水解酶LXYL?P1?2在制備非天然人參皂苷12β?O?Glc?PPD和12β?O?Glc?PPT中的用途，制備12β?O?Glc?PPD和12β?O?Glc?PPT的方法，以及生產12β?O?Glc?PPD和12β?O?Glc?PPT的重組細胞。因此，本發明通過生物方法，實現12β?O?Glc?PPD和12β?O?Glc?PPT的規模化制備。

技術領域

本發明涉及糖基水解酶LXYL-P1-2在制備非天然人參皂苷12β-O-Glc-PPD 和12β-O-Glc-PPT中的用途，12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的制備方法，以 及生產12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的重組細胞。

背景技術

藥理學研究證明，人參的主要活性成分是人參皂苷(ginsenoside)。人參皂苷 屬于三萜類化合物，根據苷元骨架不同可分為兩種類型：一類是達瑪烷型四環三 萜類皂苷；另一類是齊墩果烷型五環三萜類皂苷。達瑪烷型皂苷在人參皂苷中占 絕大多數，是其中的主要活性成分。達瑪烷型皂苷又包括人參二醇型皂苷和人參 三醇型皂苷。在糖基轉移酶的作用下，在原人參二醇(protopanoxadiol，PPD)的 C3-OH和C20-OH上引入一個或幾個糖基形成人參二醇型皂苷；在原人參三醇 (protopanaxatriol，PPT)的C6-OH和C20-OH上引入一個或幾個糖基形成人參三 醇型皂苷。

PPD和PPT除了C3-OH、C6-OH和C20-OH，還有C12-OH，但在人參中還 未發現C12-OH糖基化的皂苷。Atopkina等以PPD為前體，以乙酰溴代葡萄糖為 糖基供體，在氧化銀和二氯甲烷的催化下，通過化學方法半合成C12-OH糖基化 的非天然人參皂苷12β-O-D-吡喃葡萄糖基-達瑪-24-烯-3β,12β,20S-三醇 (12β-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,12β,20S-triol，簡稱 12β-O-Glc-PPD)，并進行了藥理活性研究。結果發現，12β-O-Glc-PPD對肺癌細 胞的細胞毒活性明顯高于Rg3、Rh2等天然人參皂苷(Atopkina LN,MalinovskayaGV,Elyakov GB,et al.，Cytotoxicity of natural ginseng glycosides andsemisynthetic analogues，Planta Medica，1999，65(1)：30-34)。牛一鳴等以C3和C6位羥基乙 酰化保護而C12位羥基裸露的PPT為前體，以特定的鄰炔基苯甲酸酯為糖基供體， 在PPh3AuNTf2為催化劑條件下，合成了Chikusetsusaponin L₁₀(即 12β-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,6α,12β,20S-tetraol，簡稱 12β-O-Glc-PPT)(牛一鳴，人參皂苷的高效合成，鄭州：鄭州大學，2012，以引 用的方式將其整體并入本文)。但化學合成方法存在副產物多、收率低和成本高 的問題，且合成過程中會產生大量污染物，對環境造成危害。

有鑒于此，亟待挖掘非天然人參皂苷12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的新的 生產途徑。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種糖基水解酶LXYL-P1-2在制備非天然人參 皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。進一步提供一種生產非天然 人參皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT的方法，以及生產12β-O-Glc-PPD 的重組細胞。