[發(fā)明專(zhuān)利]一種制備12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710955862.3
• 申請(qǐng)日: 2017-10-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109666714A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊金玲;朱平;梁會(huì)超;張婷婷;胡宗風(fēng);李燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12P33/00
• 分類(lèi)號(hào): C12P33/00;C12N1/19;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.糖基水解酶LXYL-P1-2在制備非天然人參皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其特征在于，底物為3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT。

3.一種生產(chǎn)非天然人參皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT的方法，其特征在于，所述方法包括使用糖基水解酶LXYL-P1-2水解底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT的C3位糖基，生成12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)將所述底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT溶解，制成底物溶液；

(2)在pH為3.0～6.0的緩沖液中，加入步驟(1)的底物溶液和糖基水解酶LXYL-P1-2，在反應(yīng)溫度為25～50℃的條件下，反應(yīng)24h，水解底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT的C3位糖基，從而得到12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，將所述底物用二甲基亞砜溶解；步驟(2)中所述緩沖液為醋酸-醋酸鈉緩沖液，所述的醋酸-醋酸鈉緩沖液的濃度為10～200mM；所述的pH為3.5～5，所述的反應(yīng)溫度為35～50℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其特征在于，所述的醋酸-醋酸鈉緩沖液的濃度為50～100mM；所述的pH為4.0～4.5；反應(yīng)溫度為35～45℃。

7.一種生產(chǎn)12β-O-Glc-PPD的重組細(xì)胞，所述重組細(xì)胞中導(dǎo)入有編碼以下蛋白的基因：達(dá)瑪烯二醇-II合酶、原人參二醇合酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細(xì)胞色素P450還原酶、糖基轉(zhuǎn)移酶BsUGT1和糖基水解酶LXYL-P1-2。

8.一種生產(chǎn)12β-O-Glc-PPT的重組細(xì)胞，所述重組細(xì)胞中導(dǎo)入有編碼以下蛋白的基因：達(dá)瑪烯二醇-II合酶、原人參二醇合酶、原人參三醇合酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-細(xì)胞色素P450還原酶、糖基轉(zhuǎn)移酶BsUGT1和糖基水解酶LXYL-P1-2。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8任一項(xiàng)所述的重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞選自于大腸桿菌、釀酒酵母和/或畢赤酵母細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求7或8任一項(xiàng)所述的重組細(xì)胞，其特征在于，在所述重組細(xì)胞中，所述達(dá)瑪烯二醇-II合酶與綠色熒光蛋白GFP融合表達(dá)。

11.根據(jù)權(quán)利要求7或8任一項(xiàng)所述的重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞為羊毛甾醇合酶ERG7基因表達(dá)被下調(diào)的細(xì)胞。

12.權(quán)利要求7-11任一項(xiàng)所述的重組細(xì)胞在制備非天然人參皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。