[發(fā)明專利]一種兩步酶解松仁蛋白制備抗疲勞肽的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710955426.6
• 申請日: 2017-10-14
• 公開（公告）號: CN107513547A
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王振宇;鄭元元;井晶;趙海田;李景彤;劉迪迪
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 哈爾濱龍科專利代理有限公司23206
• 代理人: 高媛

1.酶解松仁蛋白抗疲勞肽的制備方法，包括以松仁蛋白為原料，其特征是：具有如下步驟：

（1）脫殼松仁粉碎，過40目篩，采用索氏提取法提取松仁油，得到脫脂松仁，利用超聲輔助水提法提取松仁蛋白，凍干保存；

（2）將步驟（1）處理的松仁蛋白配制一定的濃度，調(diào)胃蛋白酶的最適溫度，將松仁蛋白溶液在胃蛋白酶的最適溫度預(yù)熱，加入胃蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后滅酶，再加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后滅酶；

（3）將步驟（2）所得的酶解液，離心后，將酶解液依次進(jìn)行活性炭靜態(tài)吸附、超濾、離子交換層析和冷凍干燥，得到抗疲勞肽；

所述的預(yù)熱是在攪拌條件下進(jìn)行的，預(yù)熱時間為10min~20min，滅酶的條件為溫度100℃，滅酶5~10min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解松仁蛋白抗疲勞肽的制備方法，其特征是：步驟（2）所述的松仁蛋白酶解采用的酶是兩種體內(nèi)酶，即胃蛋白酶和胰蛋白酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解松仁蛋白抗疲勞肽的制備方法，其特征是：步驟（2）所述的松仁蛋白第一步胃蛋白酶的酶解條件為：加酶量8000U/g~10000U/g，酶解溫度為36~38℃，pH為2.0~3.0，酶解時間2h~3h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解松仁蛋白抗疲勞肽的制備方法，其特征是：步驟（2）所述的松仁蛋白第二步胰蛋白酶的酶解條件為：加酶量10000U/g~12000U/g，酶解溫度為45~50℃，pH為8.0~8.5，酶解時間60min~120min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解松仁蛋白抗疲勞肽的制備方法，其特征是：步驟（3）所述的離子交換層析條件為5mg/mL~15mg/mL，所述步驟（3）中的離子交換層析的具體過程為：層析的具體過程為：首先用pH4.0的醋酸鈉緩沖液（0.02~0.05mol/L）平衡柱子，之后用含0~1mol/L或0~2mol/LNaCl的醋酸鈉緩沖液（0.02mol/L）進(jìn)行線性梯度洗脫，流速為2~3mL/min，每2~3min收集一管。收集所得的高活性的小分子肽組分經(jīng)冷凍干燥，得抗疲勞肽。