[發(fā)明專利]一種用于乙型肝炎病毒檢測的核酸序列及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710952722.0
• 申請日: 2017-10-13
• 公開（公告）號: CN107604096B
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任緒義;虞閏六;羅英;宣文靜
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州迪安醫(yī)學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

本發(fā)明公開了一種用于檢測乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的核酸序列及試劑盒，屬于分子診斷技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的檢測HBV的引物及探針能特異地擴增并檢測A?I 9個HBV基因型的病毒DNA。本發(fā)明還公開了用于檢測乙型肝炎病毒的試劑盒，能實現(xiàn)快速、靈敏、準確的檢測HBV病毒各種亞型的準確拷貝數(shù)。本發(fā)明具有操作簡便、特異性強、敏感性高、成本低廉及高通量等優(yōu)點，可用于臨床HBV病毒DNA的快速超敏檢測，為臨床慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)的診斷和治療提供參考依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于乙型肝炎病毒檢測的核酸序列及試劑盒。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，簡稱乙肝病毒或HBV)是一種DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)。根據(jù)目前所知，HBV就只對人和猩猩有易感性，引發(fā)乙型病毒性肝炎疾病。慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)是由于HBV在人肝細胞中慢性感染所致的一種肝臟炎癥疾病，并可引起多器官損害的一種疾病。主要侵犯兒童及青壯年，其持續(xù)進展可導致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌。CHB廣泛流行于世界各國，據(jù)估計，全球有超過2.4億人慢性感染乙型肝炎(乙肝表面抗原陽性持續(xù)至少6個月)。每年有超過68.6萬人死于乙型肝炎并發(fā)癥，包括肝硬化和肝癌。乙型肝炎是影響衛(wèi)生工作者的一大職業(yè)危害。因此，它已成為嚴重威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當前流行最為廣泛、危害性最嚴重的一種疾病。乙型病毒性肝炎無一定的流行期，一年四季均可發(fā)病，但多屬散發(fā)。近年來乙肝發(fā)病率呈明顯增高的趨勢。中國HBV感染人數(shù)超過7億，其中有約1.2億攜帶者，超過2000萬慢性感染者，且每年新增HBV感染人數(shù)約50萬，是世界上HBV感染率最高的國家之一。

目前對于CHB患者最主要的治療措施是抗病毒治療，目前應(yīng)用最廣泛的一類藥物是核苷(酸)類似物(包括拉米夫定、阿德福韋酯、替比夫定、恩替卡韋、替諾福韋酯等)，以及干擾素等其他藥物。而抗病毒治療的療效監(jiān)測及診療方案的修訂則需要對患者血清中的HBV病毒載量進行檢測，也就是準確定量患者血中HBV DNA的拷貝數(shù)。在國內(nèi)外CHB治療指南中均指出，無論是采用何種抗HBV治療方案，均需要采用HBV DNA定量檢測試劑及方法對抗HBV療效進行評估，將CHB患者外周血中的HBV DNA控制在現(xiàn)有檢測手段檢測不到的水平。HBV DNA定量檢測試劑是指利用包括實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chainreaction，PCR)或其他的分子生物學方法在內(nèi)的核酸檢測技術(shù)，以HBV基因序列為檢測靶標，對人血清、血漿及其他人體樣本中的HBV DNA進行體外定量檢測的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實驗室指標，可作為乙型肝炎輔助診斷的指標之一，還可通過對血液中HBV DNA濃度的檢測可用于HBV感染的輔助診斷、治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。目前，國內(nèi)外進行HBV DNA定量檢測采用的最常見也是最主流的方法均為實時熒光定量PCR方法。中國CFDA于2013發(fā)布的《乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸定量檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則》中建議HBV DNA定量檢測試劑的最低檢出限應(yīng)不高于30IU/mL。美國肝病協(xié)會指出，在抗HBV治療中，HBV DNA定量水平應(yīng)盡可能小于或等于10IU/mL，歐洲肝病研究協(xié)會則指出，將HBVDNA定量水平控制在10-15IU/mL可有效防止疾病復發(fā)。超敏檢測HBV DNA有助于隨時監(jiān)測低病毒復制HBV患者的診斷和抗病毒治療效果的監(jiān)測。