[發明專利]檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710949437.3
• 申請日: 2017-10-12
• 公開（公告）號: CN107727843A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 戴克勝
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/68
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司32103
• 代理人: 孫周強,陶海鋒

1.檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑，其特征在于，所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑包括表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞以及熒光素標記的抗體。

2. 根據權利要求1所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑，其特征在于，所述人血小板特異性受體膜糖蛋白包括GP Ib-IX和/或GP IIb/IIIa；所述細胞包括中國地鼠卵巢細胞；所述熒光素包括異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明或藻紅蛋白；所述熒光素標記的抗體包括熒光素標記的羊抗人、鼠抗人或者兔抗人免疫球蛋白單克隆或者多克隆抗體。

3.根據權利要求1所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑，其特征在于，所述表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞的制備方法為，將編碼人血小板特異性受體膜糖蛋白的基因片段克隆進質粒載體得到重組質粒；然后將重組質粒轉染細胞，得到轉染細胞株；然后經過分選與培養得到表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞。

4. 根據權利要求3所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑，其特征在于，所述編碼人血小板特異性受體膜糖蛋白的基因片段包括人血小板膜蛋白GP Ibα亞基基因序列、人血小板膜蛋白GP Ibβ亞基基因序列、人血小板膜蛋白GP IX亞基基因序列、人血小板膜蛋白GP IIb亞基基因序列以及人血小板膜蛋白GP IIIa亞基基因序列中的一種或幾種；所述質粒載體包括pcDNA3.3質粒載體。

5.檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將編碼人血小板特異性受體膜糖蛋白的基因片段克隆進質粒載體得到重組質粒；

（2）將重組質粒轉染細胞，得到轉染細胞株；

（3）將轉染細胞株經過分選與培養得到表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞；

（4）表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞與熒光素標記的抗體組成檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑。

6. 根據權利要求5所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑的制備方法，其特征在于，所述編碼人血小板特異性受體膜糖蛋白的基因序列包括人血小板膜蛋白GP Ibα亞基基因序列、人血小板膜蛋白GP Ibβ亞基基因序列、人血小板膜蛋白GP IX亞基基因序列、人血小板膜蛋白GPIIb亞基基因序列、人血小板膜蛋白GPIIIa亞基基因序列中的一種或幾種；所述質粒載體包括pcDNA3.3質粒載體。

7.權利要求1所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑在檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體中的應用，或者權利要求1所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑在制備檢測血小板表面特異性自身抗體制劑中的應用。

8.檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑盒，其特征在于，所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑盒包括表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞、熒光素標記的抗體、緩沖液、封片劑。

9.利用權利要求1所述檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體的試劑檢測血小板表面受體特異性自身抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟，將待測樣本與表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞孵育，然后加入熒光素標記的抗體孵育；然后通過檢測完成血小板表面受體特異性自身抗體的檢測。

10.表達人血小板特異性受體膜糖蛋白的細胞在制備檢測抗血小板表面受體特異性自身抗體試劑中的應用。