[發(fā)明專利]鑒別布魯氏菌病A19-ΔVirB12疫苗免疫與野毒感染的方法及基于該方法的試劑盒

有效

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• 申請日: 2017-10-12
• 公開（公告）號: CN107703299B
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發(fā)明（設計）人: 任立松;陳澤良;賀筍;李延濤;何傳雨;吳冬玲;趙海龍;任郭子君
• 申請（專利權）人: 天康生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 11371 北京超凡志成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王玉桂

本發(fā)明涉及一種鑒別布魯氏菌病A19?△VirB12疫苗免疫與野毒感染的方法及基于該方法的試劑盒。所述方法包括：用間接競爭ELISA法檢測同一份待檢樣本中BMEI 1330抗體及VirB12抗體，若VirB12 OD值/BMEI 1330 OD值≥2.4，判定為VirB12缺失陽性。本發(fā)明中，用BMEI 1330抗體作為內(nèi)參，檢測時VirB12抗體與BMEI 1330抗體都在待檢樣本內(nèi)，自身對照，不需要陰性對照血清，大為減小了系統(tǒng)誤差，可顯著提升準確率。

技術領域

本發(fā)明涉及生物制品檢疫技術領域，具體而言，涉及一種鑒別布魯氏菌病A19-ΔVirB12疫苗免疫與野毒感染的方法及基于該方法的試劑盒。

背景技術

布魯氏菌病，又名地中海弛張熱、馬耳他熱、波浪熱(undulant fever)、波狀熱，是由布魯氏菌或稱布魯氏菌(Brucella)引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的人獸共患病，嚴重地威脅著人和多種動物的生命健康。本病不但對動物的繁殖和生產(chǎn)性能具有嚴重危害，更重要的是，人感染布魯氏菌后，往往難以治愈，從而造成嚴重的公共衛(wèi)生問題。因此在布魯氏菌流行的國家，消除布病一直是公共衛(wèi)生計劃中最重要的目標之一。目前全世界范圍內(nèi)消除該病的主要方法是撲殺與免疫相結(jié)合，對布病發(fā)生相對比較嚴重的中國，由于撲殺的成本高，疫苗預防成為本病主要控制手段。

在多數(shù)布病流行的國家和地區(qū)，控制家畜布病的主要手段仍是使用疫苗接種進行免疫，因此，疫苗免疫是預防和控制畜間布魯氏菌病的主要措施和最有效的手段。目前我國使用的弱毒菌疫苗有牛A19、羊M5和豬 S2；國外使用的弱毒菌疫苗有牛S19和RB51、羊Rev.1；S19由美國研發(fā)，我國從前蘇聯(lián)引進牛布魯氏菌19號苗，與S19相比較，該疫苗不缺失Ery基因，命名為A19。縱觀布魯氏菌免疫制劑研究歷史我們發(fā)現(xiàn)，布魯氏菌弱毒苗一直處于主導地位，對布魯氏菌的防治起到很大的作用，但是同時也帶來一些隱憂，首先，現(xiàn)用的布魯氏菌疫苗均為弱毒活菌疫苗，容易感染人，對人類健康存在威脅。其次，疫苗缺乏鑒別診斷標記，疫苗接種動物與自然患病動物無法甄別，造成患病動物在自然群體中長期存在，嚴重危害人類和動物的健康，阻礙動物魯氏菌病的根除和凈化。

隨著分子生物學技術的發(fā)展，基因敲除技術成為目前解決弱毒疫苗毒力強、無法用免疫學方法區(qū)分疫苗免疫和自然感染等難題的一項重要技術。為解決布魯氏菌病弱毒疫苗中存在的上述問題，有研究通過基因敲除技術獲得了1株缺失VirB12蛋白的牛布魯氏菌病分子標記苗，缺失的 VirB12蛋白能刺激機體產(chǎn)生有診斷意義的抗體，并且不改變A19疫苗的免疫原性和生物學特性，用免疫學方法可以區(qū)分疫苗免疫抗體和自然感染抗體，彌補現(xiàn)有A19苗的缺陷，對全面提升國產(chǎn)弱毒菌疫苗的性能，發(fā)揮國內(nèi)自主產(chǎn)權的布魯氏菌弱毒菌疫苗作用的意義重大，為動物布病防控提供新的疫苗。

當前，布氏菌病活疫苗(A19-ΔVirB12株)已經(jīng)進入適用階段。布魯氏菌疫苗免疫帶來的主要問題是無法區(qū)分疫苗免疫和自然感染的動物，這在很大程度上限制了布魯氏菌疫苗的使用和推廣，也給布病的有效防治和清除帶來了一定的難度。現(xiàn)有技術中用于鑒別野毒感染診斷的主要方法為間接ELISA，然而在使用該方法過程中，由于受到不同個體、不同牛場、不同種群、不同地域的影響，用間接ELISA法檢測牛血清中VirB12抗體，數(shù)值變化上下波動較大，與陰性對照OD450值比對，比值范圍不穩(wěn)定， VirB12缺失陽性檢出率較低，約為72％左右。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種鑒別布魯氏菌病A19-ΔVirB12疫苗免疫與野毒感染的方法及基于該方法的試劑盒，以解決上述問題。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發(fā)明涉及一種鑒別布魯氏菌病A19-ΔVirB12疫苗免疫與野毒感染的方法，包括：