[發(fā)明專利]脂肪酶基因、重組表達載體、重組表達菌株、脂肪酶及其制備方法、及生物柴油的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710946454.1 | 申請日： | 2017-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN107815460B | 公開（公告）日： | 2020-06-23 |
| 發(fā)明（設計）人： | 楊江科;尤遜 | 申請（專利權）人： | 武漢輕工大學 |
| 主分類號： | C12N15/55 | 分類號： | C12N15/55;C12N9/20;C12N15/81;C12N1/19;C12N15/66;C12P7/64;C12R1/84 |
| 代理公司： | 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287 | 代理人： | 胡海國 |
| 地址： | 430023 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 脂肪酶 基因 重組 表達 載體 菌株 及其 制備 方法 生物 柴油 | ||
1.一種脂肪酶基因TLLsyn，用于編碼脂肪酶，其特征在于，所述脂肪酶基因TLLsyn的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述脂肪酶基因TLLsyn的核苷酸序列編碼得到的脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述脂肪酶用于制備生物柴油。
2.一種重組表達載體，其特征在于，包括如權利要求1所述的脂肪酶基因TLLsyn。
3.如權利要求2所述的重組表達載體，其特征在于，所述脂肪酶基因TLLsyn的拷貝數(shù)為多個。
4.一種重組表達菌株，其特征在于，包括如權利要求1所述的脂肪酶基因TLLsyn。
5.如權利要求4所述的重組表達菌株，其特征在于，所述重組表達菌株的宿主細胞為畢赤酵母。
6.一種如權利要求2至3任意一項所述的重組表達載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
將合成的脂肪酶基因TLLsyn通過酶切位點EcoRⅠ連接到中間載體pUC57，獲得pUC-TLLsyn載體；
將pUC-TLLsyn載體和pAO815載體分別用EcoRⅠ酶切，電泳、膠回收脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段；
將脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段通過T4 DNA連接酶連接，獲得pAO815-TLLsyn重組表達載體。
7.一種如權利要求4至5任意一項所述的重組表達菌株的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
將合成的脂肪酶基因TLLsyn通過酶切位點EcoRⅠ連接到中間載體pUC57，獲得pUC-TLLsyn載體；
將pUC-TLLsyn載體和pAO815載體分別用EcoRⅠ酶切，電泳、膠回收脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段；
將脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段通過T4 DNA連接酶連接，獲得pAO815-TLLsyn重組表達載體；
將pAO815-TLLsyn重組表達載體導入畢赤酵母宿主細胞中，獲得重組表達菌株。
8.一種脂肪酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
將合成的脂肪酶基因TLLsyn通過酶切位點EcoRⅠ連接到中間載體pUC57，獲得pUC-TLLsyn載體，所述脂肪酶基因TLLsyn的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
將pUC-TLLsyn載體和pAO815載體分別用EcoRⅠ酶切，電泳、膠回收脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段；
將脂肪酶基因TLLsyn片段和pAO815片段通過T4 DNA連接酶連接，獲得pAO815-TLLsyn重組表達載體；
將pAO815-TLLsyn重組表達載體導入畢赤酵母宿主細胞中，獲得重組表達菌株；
培養(yǎng)重組表達菌株，從培養(yǎng)物中獲得脂肪酶。
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