[發明專利]一種金線草組織培養及快速繁殖的方法

有效

• 申請號: 201710938903.8
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107509634B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 羅潔;楊國;金葉飛;董麗佳;李雪;羅超;潘翔宇
• 申請（專利權）人: 紹興文理學院元培學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 楊天嬌

本發明公開了一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，以金線草種子為外植體，通過篩選和優化初代誘導、繼代增殖、生根和移栽培養基配方和培養條件，經過無菌苗獲取、不定芽的初代誘導、繼代增殖和生根培養以及試管苗的移栽階段，通過采用特定的改良MS培養基實現藥用植物金線草種苗的快速繁殖，一般只需80?85天就可以獲得金線草的幼苗，并且金線草幼苗的成活率可達90％以上，從而為該物種的遺傳改良、種質資源保護和開發利用奠定基礎。

技術領域：

本發明屬于植物繁殖領域，具體涉及一種金線草組織培養及快速繁殖的方法。

背景技術：

金線草(Antenoron filiforme)，別名毛蓼、山蓼、一串紅、鐵拳頭、紅花鐵菱角、蓼子七、雞心七、九龍盤。是蓼科金線草屬多年生草本，金線草分布于山西、陜西、山東、安徽、江蘇、浙江、江西、河南、湖北、廣東、廣西、四川、貴州等地。秋季采全草，割下莖葉，分別曬干備用，以根或全草入藥。具有涼血止血，清熱利濕，散瘀止痛之功效。用于吐血，肺結核咯血，子宮出血，淋巴結結核，胃痛，痢疾，跌打損傷，骨折，風濕痹痛，腰痛。近來年，金線草越來越受到人們的青睞，在園林景觀和藥用上得到廣泛的應用。

然而，目前國內外許多學者和專家對其研究集中于藥用成分和藥用功效方面，而在生物特性、組織培養和快速繁殖等方面相關研究甚少，國內外均未見報道。

發明內容：

本發明的目的是提供一種成活率高，能快速繁殖并能大量得到金線草幼苗的金線草組織培養及快速繁殖的方法。該發明具有簡單、快速、有效的特性，可直接運用于該物種的繁育和保護，具有可操作性，環保性以及發明的先進性。

為實現發明目的，本發明采取如下的技術方案：

一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，以金線草種子為外植體，依次經a無菌苗的獲取、b不定芽的初代誘導、c芽的繼代增殖、d生根培養以及e試管苗的移栽，所述的b不定芽的初代誘導是將3-5cm的無菌苗去掉葉片，剪成1-2cm左右，接種到誘導培養基上，在溫度25±1℃、光照強度40μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20d，莖段外植體誘導形成新的不定芽，所用的誘導培養基為：每升1號改良MS培養基含有BAP(芐氨基嘌呤)3.0-6.0μmol、TDZ(N-苯基-N′-1，2，3-噻二唑-5-脲)0.1-0.5μmol、NAA(萘乙酸)0.1-0.3μmol、蔗糖30g、瓊脂7.5g，pH為5.8-6.0，誘導系數為12.5-17.6。

作為優選，所述a無菌苗的獲取是將消毒后的金錢草種子接種到培養基上，在溫度25±1℃、光照強度40μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20-30d，種子萌發長成約3-5cm的種苗，所用的培養基為：每升含有硫酸鏈霉素20-50mg，蔗糖30g、瓊脂7.5g，其余為MS培養基，pH為5.8-6.0，種子萌發率約為60％-70％。

作為優選，所述c芽的繼代增殖是將不定芽叢切開，3-4個芽為一叢(注意不用接種單個芽，單個芽容易死亡)，轉入繼代的培養基上，在溫度25±1℃、光照強度50μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20d，從生芽生長健壯成芽苗，增殖系數為8.7-11.4，所用的繼代的培養基為：將BAP(芐氨基嘌呤)1-3μmol、NAA(萘乙酸)0.1-0.3μmol、蔗糖30g、瓊脂7.5g溶于1號改良MS培養基中，pH為5.8-6.0，21℃滅菌20min后得到增殖培養基。