[發明專利]一種金線草組織培養及快速繁殖的方法

有效

• 申請號: 201710938903.8
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107509634B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 羅潔;楊國;金葉飛;董麗佳;李雪;羅超;潘翔宇
• 申請（專利權）人: 紹興文理學院元培學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 楊天嬌

1.一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，以金線草種子為外植體，其特征在于依次經a無菌苗的獲取、b不定芽的初代誘導、c芽的繼代增殖、d生根培養以及e試管苗的移栽；

所述a無菌苗的獲取是將消毒后的金錢草種子接種到培養基上，所用的誘導培養基為：每升含有硫酸鏈霉素20-50mg，蔗糖30g、瓊脂7.5g，其余為MS培養基，pH為5.8-6.0，種子萌發率為60%-70%；

所述b不定芽的初代誘導是將3-5cm的無菌苗去掉葉片，剪成1-2cm，接種到誘導培養基上，在溫度25±1℃、光照強度40μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20d，莖段外植體誘導形成新的不定芽，所用的誘導培養基為：每升1號改良MS培養基含有BAP3.0 -6.0μmol、TDZ0.1-0.5 μmol、NAA0.1-0.3 μmol、蔗糖30g、瓊脂7.5g，pH為5.8-6.0，誘導系數為12.5-17.6；

所述c芽的繼代增殖是將不定芽叢切開，3-4個芽為一叢，轉入繼代的培養基上，在溫度25±1℃、光照強度50μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20d，叢生芽生長健壯成芽苗，增殖系數為8.7-11.4，所用的繼代的培養基為：每升1號改良MS培養基含有BAP1-3μmol、NAA0.1-0.3 μmol、蔗糖30g、瓊脂7.5g，pH為5.8-6.0；

所述d生根培養是將高3-4cm的芽苗分切轉入生根培養基上，在溫度25±1℃、光照強度50μmol·m^-2·s^-1、光照時間12h·d^-1的條件下，培養20d后，生根的試管苗形成，所述的生根培養基為：每升2號改良MS培養基或MS培養基含有IBA1.0 - 3.0 μmol、NAA2.0-5.0 μmol、蔗糖30g、瓊脂7.5g，pH為5.8-6；

所述e試管苗移栽是將長好根的試管苗移栽到移栽基質中，放置于遮蔭溫室中培養，每隔5d澆一次Hoagland's營養液，培養10d，再將遮陰布移除，讓金線草小苗得到充足光照，再培養15天，得到生長健壯的金線草幼苗；

所述b不定芽的初代誘導和c芽的繼代增殖中用到的1號改良MS培養基是把國際通用的MS培養基大量元素中的NH₄NO₃成分減少到原來重量的1/2，KNO₃成分減少到原來重量的3/4，KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂·2H₂O不變，其余微量元素、鐵鹽、有機成分不變；

所述d生根培養用到的2號改良MS培養基是把國際通用的MS培養基大量元素中的KNO₃、NH₄NO₃、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O成分減少到原來重量的1/2，CaCl₂·2H₂O不變，其余微量元素、鐵鹽、有機成分不變。

2.根據權利要求1所述的一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，其特征在于所述e試管苗移栽中的移栽基質為：珍珠巖、河沙和腐殖質按質量比1∶1∶2混合均勻。

3.根據權利要求1所述的一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，其特征在于金線草種子的消毒處理：先用清水將種子沖洗干凈，用無菌的紗布包住洗凈的種子，用細線拴緊，用70%酒精浸泡30-40s，拿出用無菌水沖洗3-4遍，再使用10%雙氧水溶液消毒12-15分鐘，無菌水沖洗4-6遍，得到消毒后的外植體種子。

4.根據權利要求1所述的一種金線草組織培養及快速繁殖的方法，其特征在于所述的金線草種子為11月晴朗的上午采集到的野生金線草種子。