[發(fā)明專利]一種測定金霉素預(yù)混劑含量及相關(guān)物質(zhì)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710938501.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN107727766A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝昌賢;秦定宇;金玲玲;楊曉亞;劉運(yùn)添;云喜報(bào);王鵬飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 金河生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11275
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析測試技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測定金霉素預(yù)混劑含量及相關(guān)物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

金霉素預(yù)混劑作為一種飼料添加劑，是金霉素生產(chǎn)菌的全發(fā)酵液與適量碳酸鈣制成的金霉素鈣鹽，其中的活性成分主要是金霉素，但是，也含有一些相關(guān)的發(fā)酵副產(chǎn)物，如四環(huán)素，差向四環(huán)素，差向金霉素，去甲基金霉素，2-乙酰-2-去甲酰胺基四環(huán)素，2-乙酰-2-去甲酰胺基金霉素等。在獸藥國家標(biāo)準(zhǔn)中，金霉素含量采用微生物檢定法進(jìn)行測定，沒有給出對(duì)相關(guān)物質(zhì)的檢測控制要求。實(shí)踐表明，采用微生物法測定含量有幾個(gè)弊端：1)方法繁瑣，耗時(shí)較長，造成工作效率低；2)方法的影響因素多，對(duì)含量測試的準(zhǔn)確度有較大的影響；3)測試成本較高；4)相關(guān)物質(zhì)不能同時(shí)得到檢測控制。這些缺陷，制約著工業(yè)化生產(chǎn)金霉素預(yù)混劑生產(chǎn)進(jìn)程和質(zhì)量控制，造成生產(chǎn)效率低，質(zhì)量控制不穩(wěn)定。

鑒于上述情況，需要發(fā)明一種既可以對(duì)金霉素含量進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的測試，又能夠?qū)ζ渲械南嚓P(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測監(jiān)控的合二為一的檢測方法，從而達(dá)到提高檢測效率，降低檢驗(yàn)成本的目的。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種測定金霉素預(yù)混劑含量及相關(guān)物質(zhì)的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1、一種測定金霉素預(yù)混劑含量及相關(guān)物質(zhì)的方法，所述方法為高效液相色譜法，色譜條件為：

色譜柱：C18，2.2μm，2.0×75mm；

柱溫：45℃；

檢測波長：280nm；

流動(dòng)相：以體積比為220:80:100的水、磷酸溶液和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液為流動(dòng)相，所述磷酸溶液的濃度為2mol/L；

泵流量：0.4mL/min；

進(jìn)樣體積：4μL；

運(yùn)行時(shí)間：5min。

進(jìn)一步，所述相關(guān)物質(zhì)為四環(huán)素，差向四環(huán)素，差向金霉素，去甲基金霉素，2-乙酰-2-去甲酰胺基四環(huán)素和2-乙酰-2-去甲酰胺基金霉素。

進(jìn)一步，所述高效液相色譜法具體包括如下步驟：

(1)配置金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：取金霉素標(biāo)準(zhǔn)品用0.01mol/L HCl稀釋配制成金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，備用；

(2)配置金霉素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液：按照現(xiàn)有金霉素預(yù)混劑中金霉素含量規(guī)格，以步驟(1)中金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液為母液用0.01mol/L HCl稀釋配制成具有不同含量規(guī)格的金霉素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液，過0.22μm濾膜，備用；

(3)配置金霉素供試品溶液：取金霉素預(yù)混劑樣品用0.01mol/L HCl稀釋配制成金霉素供試品溶液，過0.22μm濾膜，備用；

(4)利用高效液相色譜儀測試：取相同體積的金霉素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液和金霉素供試品溶液，注入高效液相色譜儀，按照權(quán)利要求1或2所述的色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析；

利用峰面積外標(biāo)法，各相關(guān)物質(zhì)含量采用主成分自身對(duì)照法進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算公式如下：

金霉素預(yù)混劑中金霉素或

A_供：為金霉素供試品溶液圖譜中相應(yīng)組分的峰面積；

A_工：為金霉素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液圖譜中金霉素的峰面積；

m_標(biāo)：為金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中金霉素標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量；

m_供：為金霉素供試品溶液中金霉素預(yù)混劑樣品的質(zhì)量；

N％：為金霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中金霉素的質(zhì)量體積百分比。

進(jìn)一步，步驟(3)中，所述金霉素供試品溶液中金霉素濃度為160-240μg/mL。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了一種測定金霉素預(yù)混劑含量及相關(guān)物質(zhì)的方法，該方法通過優(yōu)化色譜條件，不僅節(jié)約了各溶液用量，同時(shí)還提升了檢測速度及精度，具體為：

(1)實(shí)現(xiàn)了金霉素和相關(guān)物質(zhì)含量的同時(shí)測定，并且每5分鐘可完成一次數(shù)據(jù)采集，相比普通液相方法，檢測效率提高十倍，大大降低檢驗(yàn)成本。

(2)重復(fù)性好，連續(xù)6次進(jìn)樣測定同一個(gè)樣品，金霉素峰面積RSD為0.11％，四環(huán)素峰面積RSD為0.26％，差向四環(huán)素峰面積RSD為1.7％，差向金霉素峰面積RSD為0.49％，去甲基金霉素峰面積RSD為1.8％，2-乙酰-2-去甲酰胺基四環(huán)素峰面積RSD為0.60％，2-乙酰-2-去甲酰胺基金霉素峰面積RSD為1.1％，均符合常規(guī)的RSD不大于2％的要求。