[發(fā)明專(zhuān)利]從大鯢肉骨提取的小分子肽及其提取方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710937028.1
• 申請(qǐng)日: 2017-10-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107674901B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吉建國(guó);劉艾平;夏豫忠;楊斌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北世厚耀榜紀(jì)田農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司;付俊;夏豫忠;劉艾平;吉建國(guó);楊斌
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 深圳市合道英聯(lián)專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果;侯峰

1.一種大鯢肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，該方法通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)：

步驟1，對(duì)大鯢進(jìn)行清洗粉碎，獲得大鯢肉骨，蒸煮所述大鯢肉骨，獲得大鯢骨湯；

步驟2，對(duì)所述大鯢骨湯進(jìn)行磁化，然后將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入磁化后的所述大鯢骨湯進(jìn)行肽鏈的酶剪切，獲得酶剪切液；

所述步驟2具體為：將所述大鯢骨湯置于強(qiáng)力磁化機(jī)，在4700高斯磁場(chǎng)下磁化5s，將磁化后的所述大鯢骨湯冷卻至45-50℃，再采用鹽酸溶液調(diào)節(jié)所述大鯢骨湯的pH值至5.0-6.0，然后將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入調(diào)節(jié)后的所述大鯢骨湯，攪拌加入三種所述酶制劑后的大鯢骨湯6-8h，直至所述大鯢骨湯的肽鏈的酶剪切完畢，然后加熱滅酶去腥，最后冷卻至室溫，過(guò)濾后獲得的濾液為酶剪切液；

所述將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入調(diào)節(jié)后的所述大鯢骨湯，具體為：將所述第一酶制劑按所述大鯢肉骨重量0.01%加入所述大鯢骨湯，攪拌12-18min后按所述大鯢肉骨重量0.01%加入所述第二酶制劑，再攪拌12-18min后按所述大鯢肉骨重量0.01%加入所述第三酶制劑；

所述第一酶制劑為胰蛋白酶，所述第二酶制劑為胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制劑為彈性蛋白酶；

步驟3，向所述酶剪切液中加入蛋白分離液，離心分離后過(guò)濾獲得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷卻離心分離獲得大鯢小分子肽；

所述步驟3具體為：向所述酶剪切液中加入蛋白分離液，加熱反應(yīng)，待分離后的所述酶剪切液冷卻后，離心分離10min，除去濾渣獲得上清液，向所述上清液中加入酒精在18-21℃下激活24h，直至所述上清液為漿狀，離心分離去除上層清液獲得大鯢小分子肽；

步驟4，將所述步驟3獲得的所述大鯢小分子肽提純?yōu)楹}大鯢小分子肽，具體為：采用Tris-Hcl緩沖液將所述大鯢小分子肽溶鮮并定容至100ml，獲得溶液；將所述溶液在2000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離10min，收集上層清液；將所述上層清夜轉(zhuǎn)入G-75層析柱過(guò)柱層析并采用Tris-Hcl緩沖液洗脫，獲得層析液，收集峰值段為200-280nm的所述層析液并進(jìn)行冷凍干燥，獲得含鹽大鯢小分子肽；

步驟5，將所述步驟3獲得的所述大鯢小分子肽提純?yōu)槊擕}大鯢小分子肽，具體為：采用Tris-Hcl緩沖液將所述大鯢小分子肽溶鮮并定容至10ml，獲得溶液；將所述溶液在2000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離10min，收集上層清液；將所述上層清夜轉(zhuǎn)入G-25層析柱過(guò)柱層析并采用三蒸水緩沖液洗脫，獲得層析液，收集峰值段為200-250nm的所述層析液并進(jìn)行冷凍干燥，獲得脫鹽大鯢小分子肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大鯢肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，所述步驟1具體為：采用粉碎機(jī)對(duì)大鯢進(jìn)行粉碎，清洗后獲得大鯢肉骨，將所述大鯢肉骨和純凈水加入蒸煮罐內(nèi)，在0.2MPa壓力下以132℃高壓蒸煮60min，排出殘?jiān)@得大鯢骨湯。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大鯢肉骨小分子肽的提取方法，其特征在于，所述蛋白分離液為99%酒精。