[發明專利]從大鯢肉骨提取的小分子肽及其提取方法

有效

• 申請號: 201710937028.1
• 申請日: 2017-10-10
• 公開（公告）號: CN107674901B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 吉建國;劉艾平;夏豫忠;楊斌
• 申請（專利權）人: 湖北世厚耀榜紀田農業發展有限公司;付俊;夏豫忠;劉艾平;吉建國;楊斌
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 深圳市合道英聯專利事務所(普通合伙) 44309
• 代理人: 廉紅果;侯峰

本發明公開了從大鯢肉骨提取的小分子肽及其提取方法，該提取方法通過對大鯢骨湯進行磁化，然后將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入磁化后的所述大鯢骨湯進行肽鏈的酶剪切，獲得酶剪切液；最后，向所述酶剪切液中加入蛋白分離液，離心分離后過濾獲得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷卻離心分離獲得大鯢小分子肽；這樣，該方法直接對磁化后的大鯢骨湯進行肽鏈的酶剪切，磁化過程能夠使牢固的肽鏈出現了裂痕及部分脫落，并且與第一酶制劑、第二酶制劑、第三酶制劑配合，操作性強，其對小分子多肽的提取率高達2.77％，有助于加速肽鏈的酶剪切，同時減少了酶制劑的用量，從而減少了酶解帶來的污染，降低了生產成本。

技術領域

本發明屬于生物肽分離技術領域，具體涉及一種從大鯢肉骨提取的小分子肽及其提取方法。

背景技術

肽鍵是由一個氨基酸的氨基與另一個氨基酸的羧基縮合形成的，形成的酰胺基在蛋白質化學中稱為肽鍵；氨基酸的分子最小，蛋白質最大，兩個或以上的氨基酸脫水縮合形成若干個肽鍵從而組成一個肽，多個肽進行多級折疊就組成一個蛋白質分子，蛋白質有時也被稱為“多肽”；生物體內已發現幾百種肽，是機體完成各種復雜的生理活動必不可少的參與者；在諸多的多肽中，由于小分子活性肽具有易吸收，不增加人體消化負擔，營養價值極其高而廣泛被當代人們所意識和接受，逐漸成為當下人們養生品而受熱捧。

現有的小分子肽提取技術中，提取方法單一，提取效率不高，并且酶制劑用量較高，適用場合受限制，所制備的小分子肽活性難以用于肽類藥物和肽類保健品。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的旨在提供從大鯢肉骨提取的小分子肽及其提取方法。

本發明提供的一種大鯢肉骨小分子肽的提取方法，通過以下步驟實現：

步驟1，對大鯢進行清洗粉碎，獲得大鯢肉骨，蒸煮所述大鯢肉骨，獲得大鯢骨湯；

步驟2，對所述大鯢骨湯進行磁化，然后將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入磁化后的所述大鯢骨湯進行肽鏈的酶剪切，獲得酶剪切液；

步驟3，向所述酶剪切液中加入蛋白分離液，離心分離后過濾獲得上清液，采用酒精激活所述上清液，最后冷卻離心分離獲得大鯢小分子肽。

上述方案中，所述步驟1具體為：采用粉碎機對大鯢進行粉碎，清洗后獲得大鯢肉骨，將所述大鯢肉骨和純凈水加入蒸煮罐內，在0.2MPa壓力下以132℃高壓蒸煮60min，排出殘渣，獲得大鯢骨湯。

上述方案中，所述步驟2具體為：將所述大鯢骨湯置于強力磁化機，在4700高斯磁場下磁化5s，將磁化后的所述大鯢骨湯冷卻至45-50℃，再采用鹽酸溶液調節所述大鯢骨湯的pH值至5.0-6.0，然后將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入調節后的所述大鯢骨湯，攪拌加入三種所述酶制劑后的大鯢骨湯6-8h，直至所述大鯢骨湯的肽鏈的酶剪切完畢，然后加熱滅酶去腥，最后冷卻至室溫，過濾后獲得的濾液為酶剪切液。

優選地，所述步驟2中將第一酶制劑、第二酶制劑和第三酶制劑依次分階段加入調節后的所述大鯢骨湯，具體為：將所述第一酶制劑按所述大鯢肉骨重量0.01％加入所述大鯢骨湯，攪拌12-18min后按所述大鯢肉骨重量0.01％加入所述第二酶制劑，再攪拌12-18min后按所述大鯢肉骨重量0.01％加入所述第三酶制劑。

上述方案中，所述第一酶制劑為胰蛋白酶，所述第二酶制劑為胰凝乳蛋白酶，所述第三酶制劑為彈性蛋白酶。

上述方案中，所述步驟3具體為：向所述酶剪切液中加入蛋白分離液，加熱反應，待分離后的所述酶剪切液冷卻后，離心分離10min，除去濾渣獲得上清液，向所述上清液中加入酒精在18-21℃下激活24h，直至所述上清液為漿狀，離心分離去除上層清液獲得大鯢小分子肽。

上述方案中，所述蛋白分離液為99％酒精。