[發明專利]一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法

有效

• 申請號: 201710934861.0
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN107462699B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 熊江林;吳靈英;王銳;劉玉蘭;周華林
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

本發明公開一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，包括如下步驟：配制含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液；用含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液培養斑馬魚胚胎24～120h；觀察記錄斑馬魚胚胎的死亡率，以及由斑馬魚胚胎孵化的斑馬魚幼魚的孵化率、畸形率、心包囊和卵黃囊面積、幼魚體面積，計算心包囊/幼體面積比和卵黃囊/幼體面積比，判斷黃曲霉毒素B1對斑馬魚胚胎的毒性作用。本發明以斑馬魚為試驗對象進行黃曲霉毒素B1的檢測，能夠快速獲得大量同質性好的試驗動物，降低試驗成本，且容易觀察中毒癥狀，可實時直觀地觀測魚體各組織的病理變化，提高了黃曲霉毒素B1檢測的效率、直觀性和準確性。

技術領域

本發明涉及毒理學檢測技術領域，特別涉及一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法。

背景技術

黃曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是主要由曲霉屬中的黃曲霉(Aspergillusflavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)污染谷物和谷物產品后所產生的一種次生代謝物，是一種毒性極強的劇毒物質，黃曲霉毒素的危害性在于對人體及動物肝臟有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡，已被國際癌癥研究機構列為Ⅰ類致癌物質。據文獻報道，已鑒定出的AFs多達20余種，其中在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1(AFB1)最為常見，其毒性和致癌性也最強。

有研究表明，黃曲霉毒素B1暴露能夠引起人和動物多個系統的毒性效應，包括消化系統毒性、肝臟毒性、血液毒性、免疫毒性、生殖和發育毒性等。其中，發育毒性主要體現在生長遲緩、致畸作用、功能不全或異常，以及胚胎或胎仔致死作用。為了開展AFB1的毒性研究，科研人員多以大鼠、倉鼠、豬、奶牛和家禽等為試驗對象，試驗存在研究成本高，動物繁殖周期長、單次產仔數低而不易獲得同質試驗個體，不能直觀展示活體組織器官病理變化，因此不適于作為AFB1毒性檢測及研究的理想方法。

發明內容

本發明的主要目的是提出一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，旨在降低黃曲霉毒素B1毒性檢測試驗成本，提高黃曲霉毒素B1毒性檢測的效率、直觀性和準確性。

為實現上述目的，本發明提出一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，包括如下步驟：

配制含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液；

用含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液培養斑馬魚胚胎24～120h；

觀察記錄斑馬魚胚胎的死亡率，以及由斑馬魚胚胎孵化的斑馬魚幼魚的孵化率、畸形率、心包囊和卵黃囊面積、幼魚體面積，計算心包囊/幼體面積比和卵黃囊/幼體面積比，判斷黃曲霉毒素B1對斑馬魚胚胎的毒性作用。

優選地，配制含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液的步驟包括：

將二甲基亞砜與養殖用水混合，制成二甲基亞砜儲備液；

將黃曲霉毒素B1加入二甲基亞砜儲備液中，通過超聲波破碎獲得黃曲霉毒素B1母液；

向黃曲霉毒素B1母液中加入養殖用水，制成黃曲霉毒素B1儲備液；

取黃曲霉毒素B1儲備液與二甲基亞砜儲備液和養殖用水混合，制成含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液；

其中，所述養殖用水為曝氣加熱的自來水。

優選地，所述超聲波破碎的超聲波頻率為20～25kHz，超聲波破碎的時間為8～10min。

優選地，用含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液培養斑馬魚胚胎24～120h的步驟之前還包括：

將成年斑馬魚按照雌雄比為1：2～1：3的比例移至產卵盒；

將產卵盒放入恒溫箱中保溫過夜后，自然交配并收集受精卵；

將受精卵放入恒溫箱中進行恒溫培養后，在解剖鏡下挑選發育正常的原腸胚作為斑馬魚胚胎。