[發明專利]一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法

有效

• 申請號: 201710934861.0
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN107462699B
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 熊江林;吳靈英;王銳;劉玉蘭;周華林
• 申請（專利權）人: 武漢輕工大學
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 深圳市世紀恒程知識產權代理事務所 44287
• 代理人: 胡海國

1.一種黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

將成年斑馬魚按照雌雄比為1：2～1：3的比例移至產卵盒；

將產卵盒放入恒溫箱中保溫過夜后，自然交配并收集受精卵；

將受精卵放入恒溫箱中進行恒溫培養后，在解剖鏡下挑選發育正常的原腸胚作為斑馬魚胚胎；

配制含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液；

用含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液培養斑馬魚胚胎24～120h；

觀察記錄斑馬魚胚胎的死亡率，以及由斑馬魚胚胎孵化的斑馬魚幼魚的孵化率、畸形率、心包囊和卵黃囊面積、幼魚體面積，計算心包囊/幼體面積比和卵黃囊/幼體面積比，判斷黃曲霉毒素B1對斑馬魚胚胎的毒性作用；

其中，所述成年斑馬魚的飼養餌料為熱帶小魚飼料和豐年蟲，所述斑馬魚幼魚的飼養餌料為草履蟲。

2.如權利要求1所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，配制含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液的步驟包括：

將二甲基亞砜與養殖用水混合，制成二甲基亞砜儲備液；

將黃曲霉毒素B1加入二甲基亞砜儲備液中，通過超聲波破碎獲得黃曲霉毒素B1母液；

向黃曲霉毒素B1母液中加入養殖用水，制成黃曲霉毒素B1儲備液；

取黃曲霉毒素B1儲備液與二甲基亞砜儲備液和養殖用水混合，制成含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液；

其中，所述養殖用水為曝氣加熱的自來水。

3.如權利要求2所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，所述超聲波破碎的超聲波頻率為20～25kHz，超聲波破碎的時間為8～10min。

4.如權利要求1所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，將成年斑馬魚按照雌雄比為1：2～1：3的比例移至產卵盒的步驟之前還包括：

將斑馬魚置于具有恒溫循環水系統的培養缸中飼養，其中，所述培養缸中的養殖用水為曝氣加熱的自來水，培養缸中的水溫為26～30℃，水中溶氧大于5.0mg/L，pH為6.8～7.2，保持光照12～16h/黑暗8～12h的光照周期。

5.如權利要求1所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，將產卵盒放入恒溫箱中保溫過夜后，自然交配并收集受精卵的步驟中：

所述保溫過夜的溫度為26～28℃，時間為10～14h。

6.如權利要求1所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，將受精卵放入恒溫箱中進行恒溫培養后，在解剖鏡下挑選發育正常的原腸胚作為斑馬魚胚胎的步驟中：

所述恒溫培養的溫度為26～28℃，時間為2.5～3.5h。

7.如權利要求1所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，用含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液培養斑馬魚胚胎24～120h的步驟包括：

將斑馬魚胚胎清洗后移入六孔板中；

向六孔板的孔中加入含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液，放入恒溫箱中恒溫培養24～120h。

8.如權利要求7所述的黃曲霉毒素B1毒性的檢測方法，其特征在于，向六孔板的孔中加入含有不同黃曲霉毒素B1濃度的培養液，放入恒溫箱中恒溫培養24～120h的步驟中：

所述恒溫培養的溫度為26～28℃，每隔12h更換所述培養液。