[發(fā)明專利]一種檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR引物及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710930202.X
• 申請日: 2017-10-09
• 公開（公告）號: CN107513573A
• 公開（公告）日: 2017-12-26
• 發(fā)明（設計）人: 修偉明;魯軍;李剛;趙建寧;楊殿林
• 申請（專利權(quán)）人: 農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11246
• 代理人: 夏艷

1.一種檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR引物，其特征在于，所述檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR引物的序列為：SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；SEQ ID NO：3；SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5；SEQ ID NO：6；SEQ ID NO：7；SEQ ID NO：8；SEQ ID NO：9；SEQ ID NO：10。

2.一種利用權(quán)利要求1所述檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR引物的檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR的檢測方法，其特征在于，所述檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR的檢測方法包括以下步驟：

步驟一，合成引物；

步驟二，制備檢測樣品的DNA模板；

步驟三，配制PCR反應體系；

步驟四，進行PCR反應；

步驟五，取PCR反應產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳。

3.如權(quán)利要求2所述的檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR的檢測方法，其特征在于，所述步驟三中各引物加入終濃度分別為：CruA-F/R 0.1μM,T45-F/R1.2μM,GT73-F/R 0.6μM,RF2-F/R 4μM,RF3-F/R 0.3μM。

4.如權(quán)利要求2所述的檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR的檢測方法，其特征在于，所述步驟三中DNA模板終濃度為2ng/μL。

5.如權(quán)利要求2所述的檢測轉(zhuǎn)基因油菜轉(zhuǎn)化載體的五重PCR的檢測方法，其特征在于，所述步驟四中PCR反應條件為：94℃變性5min；進行40次循環(huán)擴增反應，94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸5min；引物退火溫度為58℃。