[發(fā)明專利]一種生物酶催化制備硝苯基二醇的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710926775.5 | 申請日： | 2017-10-08 |
| 公開（公告）號： | CN107418983A | 公開（公告）日： | 2017-12-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙媛媛;畢康平;李丹;張雪健 | 申請（專利權(quán)）人： | 青島科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12P13/00 | 分類號： | C12P13/00;C12N9/08 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 266061 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 生物酶 催化 制備 苯基 方法 | ||
1.一種生物酶催化制備硝苯基二醇的方法，其特征在于用豆莢過氧化物酶催化制備2-氯-4-甲氧基-6-硝基苯-1,3-二醇，底物為2-氯-4-甲氧基苯-1,3-二醇，生產(chǎn)的目標產(chǎn)物為2-氯-4-甲氧基-6-硝基苯-1,3-二醇，反應(yīng)介質(zhì)為水-乙酸乙酯，其中水相為pH6.7的磷酸鹽緩沖液，水相：乙酸乙酯=80:20，將底物溶入乙酸乙酯，然后加入反應(yīng)器，反應(yīng)溫度50-52℃，反應(yīng)時間為8.4-9.2h，豆莢過氧化物酶濃度為4-5mU/ml，底物濃度為30mM，NaNO2濃度為350mM，H2O2采用流加的加料方式，反應(yīng)開始時，加入H2O2，使其濃度為8.5mM，啟動酶催化反應(yīng)；然后開始流加，用蠕動泵加入H2O2，使?jié)舛染S持在7.5-9.5mM；反應(yīng)結(jié)束后，得到目標產(chǎn)物，用環(huán)己烷萃取3次，合并有機相，減壓蒸出有機溶劑，得到產(chǎn)物；底物轉(zhuǎn)化率為88.1-89.4%，目標產(chǎn)物產(chǎn)率為71.4-71.8%。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述豆莢過氧化物酶的提取方法為：
新鮮大豆莢用粉碎機粉碎后，粒度小于1mm，加5倍大豆莢質(zhì)量的去離子水室溫下浸泡4小時，過濾浸泡液，得到初提液，初提液體積V；攪拌中對初提液加入固體硫酸銨，使成45%飽和度，此時體積為V1；繼續(xù)攪拌中再加入0.3V的預(yù)冷丙酮，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心，得到上清液1，對上清液1加入固體硫酸銨，按V1體積計算加到75%飽和度，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心；此時，在水相與丙酮相界面處將形成一層沉淀，即沉淀1，取沉淀1，加入沉淀1體積5倍的去離子水溶解沉淀1，超濾脫鹽后，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心，得到上清液2，上清液2體積V2，取上清液2，用丙酮分級沉淀：對上清液2先加1.0V2體積預(yù)冷丙酮，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心，得到上清液3，對上清液3再加0.8V2體積丙酮，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心，得到沉淀2；減壓抽干沉淀2中的丙酮，加10倍沉淀2體積的去離子水溶解沉淀2，調(diào)pH到8.0，加1mol/L硫酸鋅，使硫酸鋅成0.01mol/L終濃度，經(jīng)5000rpm，10分鐘離心，得上清液4；將上清液4調(diào)pH至7，用超濾脫鹽濃縮，冷凍干燥，得到豆莢過氧化物酶粉，酶活為30-40U/mg；
用干豆莢也可提取豆莢過氧化物酶，方法如下：干大豆莢，加12倍干大豆莢質(zhì)量的去離子水浸泡1小時，用粉碎機粉碎后，4℃浸泡過夜，將浸泡液過濾后，得到初提液，初提液體積V；其余步驟同鮮豆莢。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于青島科技大學(xué)，未經(jīng)青島科技大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201710926775.5/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
