[發明專利]一種莖尖玻璃化超低溫脫除蘋果病毒的方法

有效

• 申請號: 201710920265.7
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107667857B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 高志紅;李艷林;渠慎春;欒雨婷
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

本發明公開一種莖尖玻璃化超低溫脫除蘋果病毒的方法，包括以下步驟：(1)攜帶病毒無菌組培苗的獲得；(2)繼代擴繁培養；(3)莖尖玻璃化超低溫處理脫毒：取繼代擴繁培養后的組培苗，切取莖尖，接種于預培養基上進行預培養；將預培養過的莖尖放在裝載溶液中，20～25℃條件下裝載5～120min；然后轉至PVS?2溶液中，0～2℃下進行5～150min PVS?2玻璃化處理；然后進行液氮冷凍處理；最后進行水浴解凍處理；將解凍處理后的莖尖放入MS+1.2mol/L的蔗糖溶液中浸泡處理；(4)后期增殖擴繁培養。本發明的優點在于：①使脫毒效率大為提高，操作簡單，快速有效；②提供了從材料選取到獲得無病毒莖尖再生植株整個詳細過程的高效技術體系；③具有很好的技術效果和推廣前景。

技術領域

本發明屬于果樹脫毒種苗培育技術領域，具體涉及一種莖尖玻璃化超低溫脫除蘋果病毒的方法，該方法對蘋果常見病毒ACLSV和ApMV有較好的脫除效果，對蘋果其他常見病毒可能同樣具有較好的脫除效果。

背景技術

蘋果(Malus pumila Mill.)是薔薇科蘋果亞科蘋果屬多年生落葉喬木，原產于歐洲和亞洲中部，是世界四大水果之一，總面積和總產量僅次于柑橘和香蕉。蘋果中含有豐富的礦物質和維生素等營養成分，且是一種低熱量水果，營養成分可溶性大，易被人體吸收，更是健康佳品。蘋果品種繁多，數以千計，全世界有93個國家和地區生產蘋果，我國是世界第一大蘋果生產國。

我國栽培的蘋果普遍感染多種病毒，在生產上，蘋果病毒病是阻礙蘋果優質高產的重大因素之一。早在19世紀40年代，歐美各國已開始對蘋果進行調查鑒定工作。Bradford和Joley(1933)首次報道了蘋果病毒—蘋果花葉病的癥狀(Bradford FC,JoleyL.1933.Infectious variegation in the apple.J Agric Res 46:901-908)。2015年李世訪團隊與意大利病毒專家合作，從蘋果中鑒定出一種新的雙生病毒AGV(Liang PB,NavarroB,Zhang ZX,Wang HQ,Lu M,Xiao H,Wu QF,Zhou XP,Serio FD and LiSH.2015.Identification and characterization of a novel geminivirus with amonopartite genome infecting apple trees.Journal of General Virology,96:2411-2420)；Noda等(2017)在中國和日本的蘋果栽培區發現了一種新病毒—蘋果壞死性花葉病毒(ApNMV)(Noda H,Yamagishi N,Yaegashi H,Xing F,Xie J,Li S,Zhou T,Ito T,Yoshikawa N.2017.Apple necrotic mosaic virus,a novel ilarvirus frommosaicdiseased apple trees in Japan and China.J Gen Plant Pathol,83:83-90)，截止目前世界上報道的蘋果病毒病41種有余，我國蘋果主產區已鑒定出19種蘋果病毒，其中對蘋果品種危害較大的主要有蘋果花葉病毒(Apple Mosaic Virus,ApMV)、蘋果銹果類病毒(Apple Scar Skin Viroid,ASSVd)、蘋果褪綠葉斑病毒(Apple Chlorotic Leaf SpotVirus,ACLSV)、蘋果莖痘病毒(Apple Stem Pitting Virus,ASPV)和蘋果莖溝病毒(AppleStem Grooving Virus,ASGV)。蘋果病毒病具有極強的危害性，并且傳播速度快，發病后難治愈。它對果樹的危害會直接表現在果實上，降低蘋果產量、品質、貯藏性和耐運力，造成直接的經濟損失，另一種則在感染后不直接表現在果實上，而是表現在葉片、枝條和主干上，影響樹體根系對土壤營養的吸收和利用，影響樹體生長，逐漸削弱樹勢。