[發(fā)明專利]淫羊藿提取物中16種化學(xué)成分含量的測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710919692.3
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107655994B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何俊;孫夢潔;歐陽慧子;常艷旭;高秀梅
• 申請（專利權(quán)）人: 天津中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京柏杉松知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11413
• 代理人: 張函;王春偉

1.淫羊藿提取物中16種化學(xué)成分含量的測定方法，其特征在于，采用HPLC-MS/MS法，同時測定淫羊藿提取物中16種化學(xué)成分的含量；所述16種化學(xué)成分包括：寶霍苷II、寶霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金絲桃苷、綠原酸、木蘭花堿、新綠原酸、隱綠原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，所述方法包括：

(1)建立16種化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密稱定對照品寶霍苷II、寶霍苷I、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、槲皮苷、箭霍苷A、箭霍苷B、金絲桃苷、綠原酸、木蘭花堿、新綠原酸、隱綠原酸、淫羊藿次苷I、淫羊藿苷、紫云英苷，用體積分?jǐn)?shù)為70-100％的甲醇溶解，制成具有已知濃度的各對照品儲備溶液；然后分別精密吸取16種對照品儲備溶液并將其混合，用體積分?jǐn)?shù)為70-100％的甲醇稀釋，配制成分別具有已知濃度的16種化學(xué)成分的對照品混合儲備液；

用體積分?jǐn)?shù)為70-100％的甲醇將所述對照品混合儲備液稀釋成一系列分別具有不同已知濃度的16種化學(xué)成分的對照品混合溶液；

在相同的預(yù)設(shè)色譜條件和質(zhì)譜條件下，將V₁體積的各濃度的對照品混合溶液分別注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，獲得各對照品在不同濃度下的多反應(yīng)離子色譜圖；

以各對照品的色譜峰峰面積Y為縱坐標(biāo)，以各對照品的濃度X為橫坐標(biāo)，通過線性回歸運(yùn)算得到各化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(2)獲得淫羊藿提取物中各16種化學(xué)成分的多反應(yīng)離子色譜圖

將質(zhì)量M的淫羊藿提取物，用體積分?jǐn)?shù)70-100％的甲醇溶解至體積V₂，取上清液過濾后作為供試品溶液；

在與以上(1)步驟中相同的預(yù)設(shè)色譜條件和質(zhì)譜條件下，取體積V₁供試品溶液注入高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，獲得淫羊藿提取物中各化學(xué)成分的多反應(yīng)離子色譜圖；

(3)確定淫羊藿提取物中16種化學(xué)成分的含量

根據(jù)淫羊藿提取物中各化學(xué)成分的多反應(yīng)離子色譜圖的峰面積，及各化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定淫羊藿提取物中各化學(xué)成分的含量；

預(yù)設(shè)的色譜條件包括：

色譜柱：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠的固定相；流動相：A相為0.1％甲酸-水，B相為乙腈；梯度洗脫；柱溫：30℃；流速：0.3mL/分鐘；進(jìn)樣量：5μL；

洗脫程序?yàn)椋?-4min，20％-50％B；4-5min，50％-60％B；5-15min，60％-70％B；

質(zhì)譜參數(shù)如下：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述確定淫羊藿提取物中各化學(xué)成分的含量，包括：

從各化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線中分別確定淫羊藿提取物中各化學(xué)成分的峰面積對應(yīng)的濃度C_濃，并按照下列公式分別計算出供試品中16種化學(xué)成分含量；

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過線性回歸運(yùn)算得到各化學(xué)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，具體為：

采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸運(yùn)算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，權(quán)重系數(shù)為1/X。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，預(yù)設(shè)的質(zhì)譜條件包括：

離子化方式：電噴霧離子化；多反應(yīng)離子監(jiān)測模式，負(fù)離子掃描；干燥氣體溫度：330-370℃；干燥氣體流速：7-15L/min；噴霧氣壓力：17-22psi；干燥氣體和霧化氣體：氮?dú)狻?/p>

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，預(yù)設(shè)的質(zhì)譜條件包括：

離子化方式：電噴霧離子化；多反應(yīng)離子監(jiān)測模式，負(fù)離子掃描；干燥氣體溫度：350℃；干燥氣體流速：9L/min；噴霧氣壓力：20psi；干燥氣體和霧化氣體：氮?dú)狻?/p>

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，淫羊藿提取物由以下方法獲得：

將淫羊藿葉在體積分?jǐn)?shù)為50-90％的乙醇中加熱回流提取0.5-2小時，乙醇與淫羊藿葉的重量比為(14-20)：1；回流提取次數(shù)1-4次；

合并提取液，減壓干燥，得淫羊藿提取物。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將淫羊藿葉在體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇中加熱回流。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，體積分?jǐn)?shù)為70-100％的甲醇具體為甲醇。