[發明專利]一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法

在審

• 申請號: 201710918474.8
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN109402231A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 詹慶才
• 申請（專利權）人: 湖南省農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發明提供了一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法。本發明的方法包括：(1)供試水稻種子培育成幼苗，提取幼苗基因組DNA；(2)取符合統計學要求數量的供試水稻幼苗的基因組DNA作為模板，以SEQ ID NO.1?48所述的引物進行PCR擴增；(3)電泳觀察擴增產物，真正的雜交F1帶具有雙親互補的帶型，有兩條帶；而混雜的親本和其他常規稻種子為單帶；雜交水稻種子純度(％)＝(供試幼苗數?異品種幼苗數)÷供試幼苗數×100％。本發明方法可大規模應用，且操作簡便，整個過程在實驗室內完成，完全不占用土地資源，節約土地和成本，鑒定結果準確可靠、篩選效果明顯。本發明方法可在推廣應用，市場價值顯著。

技術領域

本發明涉及雜交水稻種子純度鑒定領域，尤其涉及一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法。

背景技術

雜交水稻的推廣對大幅度提高我國的糧食產量起了巨大的推動作用。但由于種子純度問題給農戶造成嚴重減產的事件也常有發生。我國目前鑒定種子純度的常規方法是田間種植鑒定，往往需要3-4個月的時間。一方面由于環境條件的影響，可能影響純度鑒定的準確性；另一方面，由于田間鑒定需要時間長，妨礙了種子的銷售，有的作物當年的種子要等到第二年才能銷售。建立一套準確、快速、穩定、簡單的雜交水稻種子純度鑒定方法，對于我國雜交水稻的推廣應用具有重大意義。

發明內容

為克服現有技術的不足，本發明提供一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法。

本發明提供的一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法，包括以下步驟：

(1)提取供試水稻種子基因組DNA或供試水稻種子培育成幼苗后提取幼苗基因組DNA；

(2)引物篩選：以SEQ ID NO.1～48所述的24對引物進行篩選，找出供試水稻種子雙親互補的帶型清晰的多態性引物；

(3)純度鑒定：取符合統計學要求數量的供試水稻種子或幼苗的基因組DNA作為模板，以(2)篩選得到的帶型清晰的多態性引物分別進行PCR擴增；

(4)擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察并統計結果：真正的雜交F1帶具有雙親互補的帶型，是雙帶；而混雜的親本和其他常規稻種子為單帶；雜交水稻種子純度(％)＝(供試幼苗數-異品種幼苗數)÷供試幼苗數×100％；所述異品種苗數即供試水稻種子中混雜的與雙親互補的帶型不同帶型的苗數。

本發明的方法中，步驟(1)提取DNA的方法不需要用液氮研磨、以及氯仿抽提、離心純化和DNA沉淀的步驟。

本發明的方法中，步驟(1)提取DNA的方法可參考中國專利CN105002163A的提取DNA的方法進行。步驟(1)提取水稻幼苗DNA的方法為在水稻幼苗中加入氫氧化鈉水溶液，沸水中煮20s～40s后加入鹽酸水溶液和緩沖溶液，繼續在沸水中煮1～3min，得到水稻DNA樣品；所述緩沖溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液；所述氫氧化鈉水溶液、鹽酸水溶液和緩沖溶液的體積比為2:2:1。

24對引物是發明人從我國生產上推廣的500個雜交稻組合中篩選得到的可用于雜交水稻品種鑒定的24對特異性引物，見表1。

表1用于純度鑒定的24對SSR多態性引物

其中，步驟(2)符合統計學要求數量為96的n倍，n為大于1的整數。