[發明專利]一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法

在審

• 申請號: 201710918474.8
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN109402231A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 詹慶才
• 申請（專利權）人: 湖南省農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種快速鑒定雜交水稻種子純度的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)提取供試水稻種子基因組DNA或供試水稻種子培育成幼苗后提取幼苗基因組DNA；

(2)引物篩選：以SEQ ID NO.1～48所述的24對引物進行篩選，找出供試水稻種子雙親互補的帶型清晰的多態性引物；

(3)純度鑒定：取符合統計學要求數量的供試水稻種子或幼苗的基因組DNA作為模板，以(2)篩選得到的帶型清晰的多態性引物分別進行PCR擴增；

(4)擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察并統計結果：真正的雜交F1帶具有雙親互補的帶型，是雙帶；而混雜的親本和其他常規稻種子為單帶；雜交水稻種子純度(％)＝(供試幼苗數-異品種幼苗數)÷供試幼苗數×100％；所述異品種苗數即供試水稻種子中混雜的與雙親互補的帶型不同帶型的苗數。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)提取DNA的方法不需要用液氮研磨、以及氯仿抽提、離心純化和DNA沉淀的步驟。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)提取水稻幼苗DNA的方法為在水稻幼苗中加入氫氧化鈉水溶液，沸水中煮20s～40s后加入鹽酸水溶液和緩沖溶液，繼續在沸水中煮1～3min，得到水稻DNA樣品；所述緩沖溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液；所述氫氧化鈉水溶液、鹽酸水溶液和緩沖溶液的體積比為2:2:1。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)符合統計學要求數量為96的n倍，n為大于1的整數。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)PCR擴增體系為，總體系為10μl時，10×buffer 1μl，2mM的dNTP0.5μl，5U/μl的Taq gold 0.04μl，模板DNA 1μl，上下游引物各0.1μl，H₂O 7.26μl。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)PCR擴增方法為，94℃預變性4分鐘；94℃變性15秒，55℃結合15秒，72℃延伸30秒，擴增35個循環；72℃延伸5分鐘。

7.如權利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，步驟(2)PCR擴增可根據待鑒定雜交水稻父本和母本的品種針對性地選擇具有雙親互補帶型的引物進行PCR。

8.權利要求1-7任一所述的方法在雜交水稻種子質量檢測中的應用。