[發明專利]一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法

有效

• 申請號: 201710917240.1
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107621397B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 萇姍姍;胡嘉裕;胡進波;石洋;劉元;李賢軍
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 楊斌

本發明公開了一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法，包括以下步驟：(1)將闊葉樹材傾斜或彎曲的樹干或樹枝鋸成圓盤，確定應拉木區域；(2)在所述步驟(1)確定后的應拉木區域選取木樣，經水煮排氣、軟化后，切取橫切面切片置于蒸餾水中洗滌；(3)將步驟(2)洗滌后的切片立即用番紅?星藍乙醇染液或番紅?星藍乙酸染液雙重染色進行，染色過程中用梯度乙醇溶液進行脫水，得到脫水染色后的應拉木膠質層顯微切片。該染色方法使用番紅?星藍染液對應拉木進行染色，可清晰地將應拉木膠質層與相鄰壁層區分開來，便于觀察膠質層的微觀結構，更有利于對圖像按照飽和度和灰值進行處理和分析，為研究應拉木提供更多可行性。

技術領域

本發明屬于應拉木研究領域，尤其涉及一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法。

背景技術

由于受到風力、雨雪、斜坡等環境因素的影響，樹木原本筆直的生長形態常常發生改變，產生傾斜生長。為了適應這種改變，闊葉材形成層往往分化應拉木以使樹干或樹枝保持其最佳的姿態。由于應拉木形成時產生的高拉伸應力，木材常產生開裂、翹曲等缺陷，對其加工和高效利用帶來極大的不便。應拉木已成為闊葉材中一種較為普遍的構造，也成為當前的研究熱點。

應拉木的解剖結構明顯不同于正常木材，其纖維細胞壁除已木質化的三壁層外，次生壁內側往往還具凝膠狀的膠質層。膠質層外形類似于凝膠類物質，且高度折光，若用傳統的單一染液染色方法，于光學顯微鏡下觀察時，難與相鄰壁層區別開，不能清晰的觀察到膠質層的解剖特征。目前，國內外已有使用番紅-固綠對染方法對應拉木切片進行染色的報道；番紅可將具有木質素成分的細胞壁染成紅色，而固綠又稱快綠溶液，為酸性染料，能將細胞質、纖維素細胞壁染成鮮艷綠色，著色很快，還可將不具木素和具有木素的細胞壁都染成綠色，因此，具有木質素成分的細胞壁呈現出紅色并伴隨有不同程度的綠色，膠質層不含木質素，基本為纖維素細胞壁層，從而呈現出綠色。但在實際操作過程中，由于固綠均可對膠質層和相鄰壁層著色，且著色很快，具體著色時間不好把握，且針對不同樣品其著色時間不一，因此在實際操作中需要進行多次預實驗進行確定，若固綠染色時間控制不當，膠質層與相鄰壁層均呈現綠色，難以得到理想的觀察效果。

膠質層作為應拉木的特有的細胞壁層，與應拉木異常的材性有直接關系。因此，研究膠質層的微觀結構對探索應拉木高生長應力的產生，解決應拉木加工利用出現的問題具有重要理論意義，但目前，用于應拉木膠質層顯微觀察染色技術，染色效果不夠理想，不能直觀的將膠質層和其他壁層區分開，而星藍染液用于應拉木染色的方法目前仍未被提及。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，克服以上背景技術中提到的不足和缺陷，提供一種能較好地將膠質層與其他壁層區分，獲得理想的染色效果的應拉木膠質層顯微切片的染色方法。

為解決上述技術問題，本發明提出的技術方案為提供一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法，包括以下步驟：

(1)將闊葉樹材傾斜或彎曲的樹干或樹枝鋸成圓盤，確定應拉木區域；

(2)在所述步驟(1)確定后的應拉木區域選取木樣，經水煮排氣、軟化后，切取橫切面切片置于蒸餾水中洗滌；

(3)將步驟(2)洗滌后的切片立即用梯度乙醇溶液脫水、番紅-星藍乙醇染液或番紅-星藍乙酸染液雙重染色，得到脫水染色后的應拉木膠質層顯微切片。