[發明專利]一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法

有效

• 申請號: 201710917240.1
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107621397B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 萇姍姍;胡嘉裕;胡進波;石洋;劉元;李賢軍
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 楊斌

1.一種應拉木膠質層顯微切片的染色方法，包括以下步驟：

（1）將闊葉樹材傾斜或彎曲的樹干或樹枝鋸成圓盤，確定應拉木區域；

（2）在所述步驟（1）確定后的應拉木區域選取木樣，經水煮排氣、軟化后，切取橫切面切片置于蒸餾水中洗滌；水煮排氣的時間為3-5h；軟化采用酒精甘油體積比1:1混合液浸泡法，軟化時間為24-72h；切取橫切面切片采用滑走式切片機或瑞士便捷切片機，所述切片厚度為10-20um；

（3）將步驟（2）洗滌后的切片立即用番紅-星藍乙酸染液進行雙重染色，番紅-星藍乙酸染液采用的番紅染液質量濃度為1-2%，番紅染液的溶劑為體積濃度50%的乙醇溶液，采用的星藍染液質量濃度為1%，星藍染液的溶劑為體積濃度3%的乙酸溶液；染色過程中用體積濃度為30-100%的梯度乙醇溶液進行脫水，具體的染色、脫水步驟為：3%乙酸溶液5min，星藍染液5min，蒸餾水1min，30%乙醇溶液1min，50%乙醇溶液1min，番紅染液24h，50%乙醇溶液5min，70%乙醇溶液5min，85%乙醇溶液5min，95%乙醇溶液5min，無水乙醇5min，無水乙醇5min，無水乙醇5min；即得到脫水染色后的應拉木膠質層顯微切片。

2.根據權利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述步驟（1）中，圓盤的厚度為20-30mm。

3.根據權利要求1所述的染色方法，其特征在于，所述步驟（1）中，確定應拉木區域采用觀察法或氯鋅碘溶液法。

4.根據權利要求3所述的染色方法，其特征在于，所述觀察法為將所述圓盤的端面砂光后進行肉眼或用10倍放大鏡進行觀察，在年輪偏寬和起毛一側區域即為所述應拉木區域。

5.根據權利要求3所述的染色方法，其特征在于，所述氯鋅碘溶液法為將所述圓盤的端面砂光后用氯鋅碘溶液進行涂刷觀察并顯色反應，呈現深褐色的區域即為所述應拉木區域，呈現淺黃色的區域則為正常木區域。

6.根據權利要求5所述的染色方法，其特征在于，所述氯鋅碘溶液的制備方法包括如下步驟：將75-85質量份的氯化鋅和34-45質量份的水配制成I液，將8-9質量份的碘化鉀、0.3-0.5質量份的碘和15-25質量份的水配制成II液，然后將所述I液和II液混合即得到所述的氯鋅碘溶液。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的染色方法，其特征在于，將步驟（3）脫水染色后得到的切片放置于載玻片上，滴加加拿大樹膠或中性快干膠，蓋上蓋玻片，制成永久切片，并于光學顯微鏡下觀察。