[發(fā)明專利]一種納米級(jí)膠原蛋白的提純方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710916698.5
• 申請(qǐng)日: 2017-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN107574217B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海新肌生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K14/78;C07K1/14
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種納米級(jí)膠原蛋白的提純方法，其特征在于，包括以下步驟，所述份均為重量份：

(1)將新鮮魚皮剪碎后加入到質(zhì)量為魚皮質(zhì)量10-30倍、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8-12％的氯化鈉水溶液中，浸漬8-24小時(shí)，浸漬溫度為30-40℃，然后離心，取離心后的沉淀，用質(zhì)量為沉淀質(zhì)量5-15倍的水沖洗表面，自然晾干，得到預(yù)處理的魚皮；

(2)將步驟(1)預(yù)處理的魚皮15-30份、0.62-1.75份蛋白質(zhì)保護(hù)劑、20-40份水加入到127.5-293份丙酮中，在溫度為3-5℃、以20-100轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速攪拌24-48小時(shí)，然后傾去上清液，用60-120份水沖洗魚皮表面，自然晾干；所述蛋白質(zhì)保護(hù)劑為海藻酸鈉；

(3)將步驟(2)處理后的魚皮加入到110-250份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，再加入3-8份胃蛋白酶、0.05-0.5份酶激活劑，在溫度為35-42℃、以20-100轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速攪拌15-40分鐘，然后停止攪拌，在溫度為35-42℃條件下靜置36-72小時(shí)，然后過100目篩，保留濾液；

(4)向步驟(3)所得濾液中加入氯化鈉至濾液中氯化鈉的濃度為5-7.5mol/L，然后離心，將離心后的沉淀加入到110-260份、0.5-1.0mol/L的乙酸水溶液中，在溫度為35-50℃、以50-200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速攪拌20-60分鐘，得到膠原蛋白粗提取液；

(5)將5.5-11.7份多庫(kù)脂鈉、0.6-3份助表面活性劑、5-15份丙醇、152-278份正辛烷混合均勻，得到反膠團(tuán)溶液，將正丁醇、氯化鉀、水按照質(zhì)量比為(2-6):(1-4):(5-20)混合均勻，然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值為8-13，得到后萃取劑，將膠原蛋白粗提取液和反膠團(tuán)溶液按照質(zhì)量比為(0.7-1.5):1混合，在溫度為15-25℃條件下萃取30-180分鐘得到前萃取液，將前萃取液離心，取離心后的有機(jī)相與后萃取劑按質(zhì)量比為(0.7-1.5)：1混合，在溫度為30-45℃條件下萃取25-120分鐘，得到后萃取液，將后萃取液離心，取離心后的水相進(jìn)行超濾，將超濾獲取的截留液冷凍干燥后，得到膠原蛋白；

所述酶激活劑為山奈提取物；所述山奈提取物的制備方法如下：將山奈粉碎后過100目篩，取山奈粉末35-50g加入到380-420g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30-50％的乙醇水溶液中，在溫度為65-75℃的條件下攪拌24-48小時(shí)，然后過200目篩，得到一次濾液和濾渣，將濾渣加入到250-300g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45-65％的乙醇水溶液中，在溫度為70-85℃的條件下攪拌6-12小時(shí)，過200目篩，得到二次濾液，合并兩次濾液，加熱蒸發(fā)濃縮至測(cè)定50℃時(shí)相對(duì)密度為1.25-1.30的稠膏，將稠膏在溫度為55-65℃、真空度為0.06-0.08MPa的條件下干燥3-8小時(shí)，得到山奈提取物。

2.如權(quán)利要求1所述納米級(jí)膠原蛋白的提純方法，其特征在于，所述助表面活性劑為非離子型表面活性劑。

3.如權(quán)利要求2所述的納米級(jí)膠原蛋白的提純方法，其特征在于，所述助表面活性劑為辛基酚聚氧乙烯醚、乙二醇單硬脂酸酯中一種或兩種的混合物。

4.一種納米級(jí)膠原蛋白，其特征在于，采用權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述方法提純得到。