[發明專利]一種天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒及其制備使用方法

在審

• 申請號: 201710915774.0
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107764989A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 吳澤東;朱衛中;張金東;吳錚;朱雨;周珍珍
• 申請（專利權）人: 安徽伊普諾康生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，尤其涉及一種天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒及其制備使用方法。

背景技術

隨著社會經濟的發展和人們生活水平的提高，人類對健康越來越重視。肝病是一種常見的危害性極大的疾病，對肝病的及時診斷及治療對于疾病的預防及診療具有重要作用。在肝功能檢查中，谷氨酸氨基轉移酶是反映肝細胞受損的指標，而天冬氨酸氨基轉移酶則是反映肝細胞壞死的指標，對二者的精準檢測可準確反映肝的狀態。

目前，對天冬氨酸氨基轉移酶的檢測多采用相應試劑盒結合全自動生化分析儀進行；然而，現有試劑盒的穩定性不好，長期儲存和使用過程中酶活性容易降低，導致測試結果不準確。

因此，目前急需一種穩定性好的天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種穩定性好的天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒及其制備使用方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：一種天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應含量為：

試劑R1：

試劑R2：

作為本發明的優選方式之一，所述試劑R1的pH為7.0-8.5。

作為本發明的優選方式之一，所述試劑R2的pH為7.5-8.0。

一種天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)配制試劑R1

a.按照試劑R1的組分含量，將三羥甲基氨基甲烷溶于純化水中，攪拌均勻，待充分溶解，配制成R1緩沖液；

b.按照試劑R1的組分含量，將三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、乙二胺四乙酸二鈉鹽、迭氮鈉、天冬氨酸溶于R1緩沖液中，攪拌均勻，待所有原料充分溶解，調節pH；

c.按照試劑R1的組分含量，將NADH、G6PD溶于上述步驟所得的混合溶液中，攪拌均勻，即制得試劑R1；

(2)配制試劑R2

a.按照試劑R2的組分含量，將三羥甲基氨基甲烷溶于純化水中，攪拌均勻，待充分溶解，配制成R2緩沖液；

b.按照試劑R2的組分含量，將三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、α-酮戊二酸溶于R2緩沖液中，攪拌均勻，待所有原料充分溶解，調節pH；

c.按照試劑R2的組分含量，將蘋果酸脫氫酶溶于上述步驟所得的混合溶液中，攪拌均勻，即制得試劑R2。

一種天冬氨酸氨基轉移酶檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

(1)將待測樣品與試劑R1混合均勻，37℃孵育1min；

(2)用全自動生化分析儀測定步驟(1)反應后的吸光度A1，

(3)再與試劑R2混合均勻，37℃孵育2min；

(4)用全自動生化分析儀測定步驟(3)反應后的吸光度A2；

(5)根據A1和A2的吸光度變化值計算出樣本中的天冬氨酸氨基轉移酶的濃度。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(1)中試劑R1和步驟(3)中試劑R2的體積比為2:1。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(2)和步驟(4)中，在主波長340nm、副波長405nm處測定吸光度A1和A2。

作為本發明的優選方式之一，所述待測樣品與試劑R1、試劑R2構成的總試劑的體積比為1：20。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(5)中A1和A2的吸光度變化值為ΔA，即A1數值減去A2數值后的差值。

試劑盒中各成分功效：

三羥甲基氨基甲烷、三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽：配制成緩沖液，主要是起到緩沖作用，保證反應過程中反應體系環境的穩定，保證檢測結果不會受到波動和影響；

迭氮鈉：作為防腐劑，主要是防止試劑在儲藏和運輸中腐敗變質；

NADH：在酶促反應中生成不同形式的輔酶，引起吸光度變化；

天冬氨酸：作為反應底物，用于生成L-谷氨酸；

G6PD：保護試劑中酶的活性，使之能夠保持高效長期儲存和使用；

α-酮戊二酸：反應底物，用于生成草酰乙酸；

蘋果酸脫氫酶：用于催化草酰乙酸反應生成NAD和蘋果酸。

本發明相比現有技術的優點在于：

(1)制備簡單、操作方便、成本低，利于推廣應用；

(2)檢測速度快，僅需3分鐘，效率高；