[發明專利]一種銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法

在審

• 申請號: 201710915773.6
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107741494A
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 吳錚;朱雨;丁先駿;莊慶華;吳澤東;朱衛中
• 申請（專利權）人: 安徽伊普諾康生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，尤其涉及一種銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法。

背景技術

銅藍蛋白(ceruloplasmin，CER)又稱銅氧化酶，是一種含銅的α2糖蛋白，分子量約為12-16萬，不易純化。目前所知，銅藍蛋白為一個單鏈多肽，每分子含6-7個銅原子，由于含銅而呈藍色，含糖約10％，末端唾液酸與多肽鏈連接，具有遺傳上的基因多形性。其作用為調節銅在機體各個部位的分布、合成含銅的酶蛋白，有著抗氧化劑的作用，并具有氧化酶活性，對多酚及多胺類底物有催化其氧化的能力。一般認為，銅藍蛋白由肝臟合成，一部分由膽道排泄，尿中含量甚微。銅藍蛋白的測定對某些肝、膽、腎等疾病的診斷有一定意義。

目前，檢測銅藍蛋白的方法主要是酶聯免疫吸附法，但酶聯免疫吸附法的具體操作相對繁瑣，且定量檢測效果不佳，結果受人為因素影響結果較大。

因此，目前急需一種操作簡單、結果檢測準確的銅藍蛋白檢測試劑盒。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供了一種操作簡單、結果檢測準確的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：一種銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)按照下列組分含量配制試劑R1：

試劑R1：

其溶劑為純化水；

①按照上述試劑R1的組分含量，配制PBS緩沖液，調節pH，作為R1緩沖液；

②按照上述試劑R1的組分含量，將NaCl、NaN₃、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1緩沖液中，攪拌均勻，待所有原料充分溶解，即制得試劑R1；

(2)按照下列組分含量配制試劑R2：

試劑R2：

其溶劑為純化水；

①按照上述試劑R2的組分含量，配制PBS緩沖液，調節pH，作為R2緩沖液；

②按照上述試劑R2的組分含量，將NaCl、NaN₃、BSA、阿拉伯膠溶于R2緩沖液中，攪拌均勻，即得R2分散液；

③制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體：

a.取粒徑為80nm和120nm的膠乳微球于MES緩沖液中，加入EDAC溶液混勻后于37℃環境中孵育混勻1h，離心去上清；再加入NHS溶液恢復至原體積后，混勻于37℃環境中孵育混勻1h，離心去上清，得混合微球乳液；

b.在混合微球乳液中加入聚乙烯對氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒徑的膠乳；離心沉淀，將剩余物質分散于MES緩沖液中，反復2-4次，最后于MES緩沖液中恢復至原體積，再加入銅藍蛋白抗體，于37℃下反應3-4h，離心，將沉淀物分散于原體積的PBS緩沖液中，反復2-4次，最后將沉淀物分散于原體積的NHS緩沖液中，加入BSA；

c.2-8℃封存45-50h，得最終所需的膠乳包被的銅藍蛋白抗體；

④用R2分散液來溶解得到的膠乳包被的銅藍蛋白抗體，超聲分散，最終制得試劑R2；其中，聚乙烯對氯甲基苯乙烯共聚物在試劑R2中的最終濃度為9％-11％。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(1)中，試劑R1的PBS緩沖液的pH為8.3。

作為本發明的優選方式之一，所述步驟(2)中，試劑R2的PBS緩沖液的pH為8.3。

作為本發明的優選方式之一，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的MES緩沖液為100mM MES緩沖液。

作為本發明的優選方式之一，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的EDAC溶液為50g/L的EDAC溶液。

作為本發明的優選方式之一，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的NHS溶液為50g/L的NHS溶液。

作為本發明的優選方式之一，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟b中，加入的BSA為30g/L的BSA。

本發明相比現有技術的優點在于：

(1)采用本方法制備的試劑盒具有較高的檢測靈敏度和準確度，且使用操作簡單、快速，從檢測到出結果只需10分鐘；

(2)乳包被的銅藍蛋白抗體的制備過程中，采取了不同粒徑的膠乳微球混合使用，大大提高了試劑盒的靈敏度和線性范圍；

(3)采用本方法制備的試劑盒與樣品所形成的抗原抗體復合物，穩定性佳，在特定波長下有一定的吸光度，特異性強；

(4)采用本方法制備的試劑盒可用于全自動生化分析儀上，適合全自動測試，可大規模的開展和推廣。