[發明專利]一種銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法

在審

• 申請號: 201710915773.6
• 申請日: 2017-09-30
• 公開（公告）號: CN107741494A
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發明（設計）人: 吳錚;朱雨;丁先駿;莊慶華;吳澤東;朱衛中
• 申請（專利權）人: 安徽伊普諾康生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 王志興

1.一種銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)按照下列組分含量配制試劑R1：

試劑R1：

①按照上述試劑R1的組分含量，配制PBS緩沖液，調節pH，作為R1緩沖液；

②按照上述試劑R1的組分含量，將NaCl、NaN₃、海藻糖、曲拉通、PEG-8000溶于R1緩沖液中，攪拌均勻，待所有原料充分溶解，即制得試劑R1；

(2)按照下列組分含量配制試劑R2：

試劑R2：

①按照上述試劑R2的組分含量，配制PBS緩沖液，調節pH，作為R2緩沖液；

②按照上述試劑R2的組分含量，將NaCl、NaN₃、BSA、阿拉伯膠溶于R2緩沖液中，攪拌均勻，即得R2分散液；

③制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體：

a.取粒徑為80nm和120nm的膠乳微球于MES緩沖液中，加入EDAC溶液混勻后于37℃環境中孵育混勻1h，離心去上清；再加入NHS溶液恢復至原體積后，混勻于37℃環境中孵育混勻1h，離心去上清，得混合微球乳液；

b.在混合微球乳液中加入聚乙烯對氯甲基苯乙烯共聚物，共聚80nm和120nm粒徑的膠乳；離心沉淀，將剩余物質分散于MES緩沖液中，反復2-4次，最后于MES緩沖液中恢復至原體積，再加入銅藍蛋白抗體，于37℃下反應3-4h，離心，將沉淀物分散于原體積的PBS緩沖液中，反復2-4次，最后將沉淀物分散于原體積的NHS緩沖液中，加入BSA；

c.2-8℃封存45-50h，得最終所需的膠乳包被的銅藍蛋白抗體；

④用R2分散液來溶解得到的膠乳包被的銅藍蛋白抗體，超聲分散，最終制得試劑R2；其中，聚乙烯對氯甲基苯乙烯共聚物在試劑R2中的最終濃度為9％-11％。

2.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，試劑R1的PBS緩沖液的pH為8.3。

3.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，試劑R2的PBS緩沖液的pH為8.3。

4.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的MES緩沖液為100mMMES緩沖液。

5.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的EDAC溶液為50g/L的EDAC溶液。

6.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟a中，采用的NHS溶液為50g/L的NHS溶液。

7.根據權利要求1所述的銅藍蛋白檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述制備膠乳包被的銅藍蛋白抗體的步驟b中，加入的BSA為30g/L的BSA。