[發(fā)明專利]CRISPR/CAS9介導(dǎo)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體靶向性敲除的caco?2細(xì)胞模型及其方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710911586.0
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN107760652A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃黎珍;鐘國瑞;謝水林;龐土慧;姜二崗;鄒淑香;李浩健;戴仁科
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102
• 代理人: 何淑珍

1.CRISPR/CAS9介導(dǎo)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體靶向性敲除caco-2細(xì)胞模型的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）對P-gp、BCRP及MRP2轉(zhuǎn)運(yùn)體設(shè)計(jì)靶點(diǎn)特異性的sgRNA，設(shè)計(jì)的sgRNA的序列如序列表中SEQ ID NO：1- SEQ ID NO：6所示，再構(gòu)建sgRNA表達(dá)載體；

2）利用CRISPR/CAS9分別設(shè)計(jì)P-gp、BCRP及MRP基因單敲除及兩兩組合雙敲除，與hCas9質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染caco-2細(xì)胞，進(jìn)行單克隆化擴(kuò)大培養(yǎng)，即得轉(zhuǎn)運(yùn)體基因靶向性的caco-2細(xì)胞模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRISPR/CAS9介導(dǎo)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體靶向性敲除caco-2細(xì)胞模型的方法，其特征在于，步驟1）中，以U6啟動(dòng)子表達(dá)sgRNA，將設(shè)計(jì)的sgRNA序列合成Oligo，構(gòu)建sgRNA表達(dá)載體。

3.由權(quán)利要求1-2任一所述方法得到的caco-2細(xì)胞模型。