[發明專利]利用藍藻黃素蛋白FNR直觀檢測目的蛋白表達純化的方法

有效

• 申請號: 201710908190.0
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN107529549B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 鄭正高;董春霞;吉雅晴;李榮貴
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;C12N1/21;C12N9/02
• 代理公司: 北京萬象新悅知識產權代理有限公司 11360
• 代理人: 李稚婷

1.一種直觀檢測目的蛋白表達純化的方法，構建目的蛋白基因與藍藻fnr基因的融合基因，并將含該融合基因的表達載體轉入表達菌種中進行表達，通過觀察表達菌液破碎后的上清液和/或其純化組分的顏色來判斷融合蛋白是否被成功表達和/或純化，如果上清液和/或純化組分偏黃色，說明目的蛋白與藍藻FNR蛋白一起被表達和/或純化，其中所述藍藻fnr基因是編碼序列表中SEQ ID No：1所示氨基酸序列的DNA分子。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在對表達的融合蛋白進行柱純化的過程中，通過觀察柱料是否變為黃色來判斷目的蛋白是否結合上柱料。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述藍藻fnr基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：2所示。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述融合蛋白的N端連接His標簽。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述藍藻fnr基因與目的蛋白基因之間插入凝血酶酶切位點的編碼序列。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，通過構建一種直觀檢測目的蛋白表達純化的表達盒實施該方法，該表達盒包括啟動子、藍藻fnr基因、多克隆位點和終止子，其中多克隆位點用于插入目的基因，插入的目的基因與藍藻fnr基因處于相同的閱讀框，其中所述藍藻fnr基因是編碼序列表中SEQ ID No：1所示氨基酸序列的DNA分子。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述表達盒還包括凝血酶酶切位點的編碼序列，該凝血酶酶切位點的編碼序列位于藍藻fnr基因與多克隆位點之間。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述表達盒在藍藻fnr基因上游連接有His標簽的編碼序列。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述表達盒依次包括：由T7啟動子和lac操縱子組成的可誘導表達元件，帶His標簽編碼序列的藍藻fnr基因，凝血酶酶切位點的編碼序列，多克隆位點和T7終止子。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，將目的蛋白X的基因x連入表達盒的多克隆位點中，形成fnr-x融合蛋白基因；將所述表達盒構建在表達載體上，然后將表達載體轉入表達菌株中誘導表達，通過觀察表達菌液破碎后上清的顏色是否偏黃色來檢測目的蛋白X是否表達；將偏黃色的上清液用鎳柱純化6×His-FNR-thrombin-X融合蛋白，若柱料為黃色，表示蛋白X已經表達并與柱料結合；然后用凝血酶酶切，洗脫之后目的蛋白X存在于洗脫液中，而6×His-FNR殘留在柱料上，從而得到純化的目的蛋白X。