[發明專利]一種造血干細胞培養基

在審

• 申請號: 201710906915.2
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN109576222A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 趙翔;宋彩霞;曹玉昊;葉勁濤;王仁杰;黃啟程;邱陽;李國焱;唐玲;胡小東
• 申請（專利權）人: 重慶金時代生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 高姜

本發明公開了一種造血干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，按終濃度計，添加劑包括以下含量的組分：海藻糖60?80ng/mL、維生素C 50?65ng/mL、小蘗堿1?3mg/mL、千金藤堿30?50μmol/mL、第一細胞因子緩釋球體1.2?2.5mg/mL、第二細胞因子緩釋球體15?30mg/mL、氯化鈉3?8mg/mL、谷胱甘肽20?30mg/mL、透明質酸5?10μg/mL、葡萄籽提取物2?5mg/mL、人參皂苷6?12mg/mL和銀耳多糖5?10mg/mL。本發明中的各組分搭配合理，特定的組分之間相互配合，可以抗病原微生物，提高造血干細胞存活率、增殖速度和活性。

技術領域

本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種造血干細胞培養基。

背景技術

造血干細胞是血液系統中的成體干細胞，是一個異質性的群體，具體長期自我更新的能力和分化成各類成熟血細胞的潛能。它是研究歷史最長且最為深入的一類成體干細胞，對研究各類干細胞，包括腫瘤干細胞，具有重要指導意義。由于造血干細胞具有多向分化的潛能，將造血干細胞移植到體內是治療白血病、淋巴瘤等惡性腫瘤、代謝性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等嚴重危害人類健康疾病的有效方法，可以有效的減輕患者的痛苦。但是，由于造血干細胞在體內的數量極少，大大的限制了造血干細胞在臨床中的應用。

骨髓、外周血和臍帶血是造血干細胞的重要來源。與骨髓和外周血造血干細胞相比，臍帶血造血干細胞更為原始，自我增殖能力最強，且臍帶血具有富含更早期的造血干細胞、采集方便，造血半細胞免疫原性弱，對異源性抗原產生的抗體少，移植過程中不需要嚴格配型，成熟性T細胞較少，采集和保存容易，無腫瘤細胞污染，對供者無損傷和副作用等優點，因而，臍帶血造血干細胞具有極大的臨床應用價值。但是，單份臍血的造血干細胞含量低，在臨床中很難用于正常體重成人患者的移植。因此，造血干細胞在移植前需要進行體外擴增。

目前，造血干細胞的體位增殖途徑主要有兩種，一種是通過基質的灌注進行體外培養，但是，基質含有各種細胞和各種蛋白成分，成分復雜且不明確，對后期造血干細胞的分離造成較大難度，且成本較高，大大限制了在造血干細胞體外增殖的中的應用；第二種是將造血干細胞接種于造血干細胞培養基進行體外培養。然而，采用現有造血干細胞培養基多數會采用胎牛血清，培養基中加入了非人源物質，對造血干細胞的培養會造成干擾，同時采用現有的培養基培養的造血干細胞大多存在活性和增殖能力較差的問題。現急需研究一種能夠提高造血干細胞的擴增率和細胞活性培養基。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供了一種造血干細胞培養基，可有效解決現有的造血干細胞培養基培養造血干細胞時存在活性和增殖能力較差的問題。

為實現上述目的，本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種造血干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，按終濃度計，添加劑包括以下含量的組分：海藻糖60-80ng/mL、維生素C 50-65ng/mL、小蘗堿1-3mg/mL、千金藤堿30-50μmol/mL、第一細胞因子緩釋球體1.2-2.5mg/mL、第二細胞因子緩釋球體15-30mg/mL、氯化鈉3-8mg/mL、谷胱甘肽20-30mg/mL、透明質酸5-10μg/mL、葡萄籽提取物2-5mg/mL、人參皂苷6-12mg/mL和銀耳多糖5-10mg/mL。

進一步地，一種造血干細胞培養基，包括基礎培養基和添加劑，按終濃度計，添加劑包括以下含量的組分：海藻糖70ng/mL、維生素C 55ng/mL、小蘗堿2mg/mL、千金藤堿38μmol/mL、第一細胞因子緩釋球體2.0mg/mL、第二細胞因子緩釋球體22mg/mL、氯化鈉4mg/mL、谷胱甘肽25mg/mL、透明質酸6μg/mL、葡萄籽提取物3mg/mL、人參皂苷7mg/mL和銀耳多糖6mg/mL。

進一步地，基礎培養基為DMEM培養基。

進一步地，第一細胞因子緩釋球體通過以下方法制備得到：