[發明專利]一種造血干細胞培養基

在審

• 申請號: 201710906915.2
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN109576222A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 趙翔;宋彩霞;曹玉昊;葉勁濤;王仁杰;黃啟程;邱陽;李國焱;唐玲;胡小東
• 申請（專利權）人: 重慶金時代生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 高姜

1.一種造血干細胞培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加劑，按終濃度計，添加劑包括以下含量的組分：海藻糖60-80ng/mL、維生素C 50-65ng/mL、小蘗堿1-3mg/mL、千金藤堿30-50μmol/mL、第一細胞因子緩釋球體1.2-2.5mg/mL、第二細胞因子緩釋球體15-30mg/mL、氯化鈉3-8mg/mL、谷胱甘肽20-30mg/mL、透明質酸5-10μg/mL、葡萄籽提取物2-5mg/mL、人參皂苷6-12mg/mL和銀耳多糖5-10mg/mL。

2.根據權利要求1所述的造血干細胞培養基，其特征在于，包括基礎培養基和添加劑，按終濃度計，添加劑包括以下含量的組分：海藻糖70ng/mL、維生素C 55ng/mL、小蘗堿2mg/mL、千金藤堿38μmol/mL、第一細胞因子緩釋球體2.0mg/mL、第二細胞因子緩釋球體22mg/mL、氯化鈉4mg/mL、谷胱甘肽25mg/mL、透明質酸6μg/mL、葡萄籽提取物3mg/mL、人參皂苷7mg/mL和銀耳多糖6mg/mL。

3.根據權利要求1或2所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述基礎培養基為DMEM培養基。

4.根據權利要求1或2所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述第一細胞因子緩釋球體通過以下方法制備得到：

(1)將葡聚糖和聚乙二醇分別加入水中，攪拌至溶解，制得8-10wt％的葡聚糖水溶液和質量濃度為8-10wt％的聚乙二醇水溶液；

(2)在0-4℃條件下，將葡聚糖水溶液和聚乙二醇水溶液按質量比為1：5-10混合，然后再加入白介素-3、白介素-6、GM-CSF和促紅細胞生成素，攪拌，形成水相-水相乳液；其中，白介素-3、白介素-6、GM-CSF和促紅細胞生成素的濃度均為1-2wt％；

(3)將聚乳酸-聚羥基乙酸加入二氯甲烷溶液中，超聲分散2-3min，得混合物，該混合物中聚乳酸-聚羥基乙酸濃度為20-25wt％；

(4)將步驟(2)所得物與步驟(3)所得物按體積比為1：2-3混合；

(5)將聚乙烯醇、殼聚糖和氯化鈉加入水中，攪拌均勻，聚乙烯醇、殼聚糖和氯化鈉的濃度分別為1-2wt％、0.6-1.2wt％和1-2wt％，然后加入步驟(4)所得物，攪拌1-1.5h，用水洗滌，然后離心分離，最后真空冷凍干燥，制得第一細胞因子緩釋球體。

5.根據權利要求4所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述第一細胞因子緩釋球體的粒徑為50-60μm。

6.根據權利要求1或2所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述第二細胞因子緩釋球體通過以下方法制備得到：

(1)將干細胞因子、FMS樣酪氨酸激酶3配體和聚乙二醇分別加入預先添加有葡聚糖和季戊四醇鋅鹽的水溶液中，攪拌均勻，得混合物1；其中，混合物1中干細胞因子、FMS樣酪氨酸激酶3配體、聚乙二醇、葡聚糖和季戊四醇鋅鹽的濃度分別為2-2.5wt％、2-2.5wt％、5-6wt％、4.5-5.5wt％和2.5-3.5wt％；

(2)將聚乳酸-聚羥基乙酸加入二氯甲烷溶液中，超聲分散2-3min，得混合物，該混合物中聚乳酸-聚羥基乙酸濃度為20-25wt％；

(3)將步驟(1)所得物與步驟(2)所得物按體積比為1：2-3混合；

(4)將聚乙烯醇、殼聚糖和海藻酸鈉加入水中，攪拌均勻，聚乙烯醇、殼聚糖和海藻酸鈉的濃度分別為1-2wt％、0.6-1.2wt％和1-2wt％，然后加入步驟(3)所得物，攪拌1-1.5h，用水洗滌，然后離心分離，最后真空冷凍干燥，制得第二細胞因子緩釋球體。

7.根據權利要求6所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述第二細胞因子緩釋球體的粒徑為60-80μm。

8.根據權利要求1或2所述的造血干細胞培養基，其特征在于，所述葡萄籽提取物通過以下方法制備得到：

(1)將葡萄籽粉碎，加入葡萄籽重量32-35％的水和0.03-0.08％的酵母，室溫下密封發酵10-12天，然后真空干燥至含量量≤7％；

(2)以無水乙醇為萃取劑，對步驟(1)所得物進行亞臨界萃取，萃取溫度為60-62℃，萃取壓力為3.8-4.0MPa，萃取時間為1-1.5h，得萃取物；

(3)將萃取物減壓濃縮至原體積的1/3-1/4，所得濃縮液以0.6-0.8V/h的流速過活性炭柱，然后用70％乙醇溶液洗脫，最后再濃縮干燥，得葡萄籽提取物。