[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710902787.4
• 申請(qǐng)日: 2017-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109576219A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李鐵鵬;高全立;王瑤
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河南省腫瘤醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0783
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0783;A61K9/127;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于，它包含如下步驟：

S1：包裝細(xì)胞的培養(yǎng)；

S2：包裝細(xì)胞的滅活；

S3：滅活的包裝細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞活化混合物的共孵育；

S4：利用擠壓技術(shù)(Extrusion)制備囊泡懸液；

S5：利用密度梯度離心法純化包裹T淋巴細(xì)胞活化混合物的囊泡。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S1中所述的包裝細(xì)胞可以為除T淋巴細(xì)胞之外的原代細(xì)胞或永生化的細(xì)胞株(系)，且不限于未經(jīng)基因修飾的細(xì)胞，培養(yǎng)在37℃、含5％的二氧化碳和95％空氣的飽和濕度溫箱中進(jìn)行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S2中所述的細(xì)胞滅活方法可以為一定劑量的伽馬射線照射(例如20-500GR)，也可以為某些化療藥物的處理(例如15ug/ml的絲裂霉素處理4個(gè)小時(shí)) 。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S3中所述的T淋巴細(xì)胞活化混合物的成分包括但不限于：抗CD3活化抗體(克隆號(hào)OKT3)，抗CD28活化抗體，白細(xì)胞介素2，白細(xì)胞介素7，白細(xì)胞介素15，白細(xì)胞介素21等。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S4中所述擠壓技術(shù)(Extrusion)包括利用手動(dòng)以及自動(dòng)的擠壓裝置(例如脂質(zhì)體擠出儀)，依次通過(guò)不同孔徑(例如：10um、5um、1um)的微孔濾膜(例如聚碳酸酯濾膜) 。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S5中所述的密度梯度離心是以碘克沙醇、蔗糖、氯化銫、氯化銣或溴化銫為密度材料，所述密度梯度為10％、20％、30％、40％、50％或更多不同濃度的所述梯度材料溶液，離心的速度為10000-200000g，離心的時(shí)間為1-24小時(shí)，離心的溫度為0-37攝氏度。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于擴(kuò)增T淋巴細(xì)胞的納米級(jí)膜性囊泡的制備方法，其特征在于：步驟S5中所述獲得的囊泡包裹有T淋巴細(xì)胞活性混合物，可以用于體內(nèi)、體外T淋巴細(xì)胞的活化和增值。