[發明專利]RT-qPCR檢測獼猴SLC2A9/GLUT9基因轉錄水平的方法

有效

• 申請號: 201710902523.9
• 申請日: 2017-09-29
• 公開（公告）號: CN108330174B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 唐東紅;王陳蕓;葉尤松;李哲麗;馬開利;魯帥堯;楊浩;肖涵;邱炳玲;陳倩;楊忠
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

本發明提供一種RT?qPCR檢測獼猴SLC2A9/GLUT9基因轉錄水平的方法，以獼猴新鮮腎臟組織提取的總RNA反轉錄成cDNA為模板，利用PCR引物組合進行實時熒光定量PCR擴增，獲得SLC2A9/GLUT9基因片段和內參基因GAPDH片段的Ct值及溶解峰；通過常規處理得到均一化后的SLC2A9/GLUT9基因倍數表達的ΔΔC(t)值，獲得SLC2A9/GLUT9基因轉錄水平相對表達值，為研究獼猴葡萄糖轉運子9功能以及相關藥物對其影響提供了有效途徑。本發明適用于實時定量PCR檢測，其操作簡單，可重復性高，檢測成本低、靈敏性高、特異性強。

技術領域

本發明涉及一種檢測方法，尤其是涉及一種用實時熒光定量qPCR法檢測獼猴葡萄糖轉運子9 SLC2A9/GLUT9基因轉錄水平的方法，屬于分子生物技術領域。

背景技術

近年來，全基因組關聯分析(Genome-wide association studies，GWAS)已檢出多個導致高尿酸血癥和痛風的易感位點及相關候選基因。其中SLC2A9、SLC22A11 和SLC22A12基因功能缺失性突變可引起遺傳性低尿酸血癥，而過表達則會加強尿酸的重吸收。ABCG2、SLC17A1 和SLC17A3 基因功能缺陷型變異會降低腎臟和腸道對尿酸的排泄量。GLUT9是一種果糖轉運蛋白，屬于SLC2A9 家族，位于腎臟腎小管上皮細胞基底外側膜上，主要負責將尿酸分泌到細胞外，是一種新型高能尿酸轉運體，在維持尿酸穩態中起重要作用。之前對于尿酸轉運蛋白的研究，主要集中于尿酸如何由腎小管轉運至上皮細胞內部，而對其如何由細胞內進入血液的過程，研究甚少。全身SLC2A9/GLUT9基因敲除小鼠表現尿液中尿酸濃度過高，且伴有早期發作的腎病，表現為結石，間質性腎炎，皮質纖維炎癥以及輕微腎機能不全等，這說明尿酸的重吸收過程受阻。與此相比，肝臟SLC2A9/GLUT9 基因鈍化小鼠只是表現出尿液和血液中尿酸濃度過高，而沒有表現出尿酸性腎病或者腎臟結構異常。以上研究證明GLUT9 能夠通過對腎臟和肝臟中尿酸的轉運作用，實現全身尿酸穩態平衡。

近年來，隨著人民生活水平的提高，飲食結構和生活習慣的改變，高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）的患病率逐年增高，流行病學研究資料表明高尿酸血癥和原發性痛風的發病呈上升趨勢，在中國，已經有1.2億的HUA人群，大約占總人口的10%，中老年及絕經后的婦女為高發人群，近年來發病年齡也呈年輕化的趨勢。高尿酸血癥與肥胖、高血壓、高脂血癥、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、胰島素抵抗的發生密切相關，已成為識別代謝綜合征的早期標志，治療和控制高尿酸血癥已成為代謝性疾病治療的重要組成部分。無論是藥物的篩選，是致病機制的研究, 都需要選擇一種科學、合理的動物模型來開展高尿酸血癥致病機理的研究及開發相關降血尿酸的藥物。