[發明專利]一種卵巢癌AnnexinA3檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710896299.7
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107831162A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 劉佐雄
• 申請（專利權）人: 北京儀諾益生科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及腫瘤檢測領域，特別涉及一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒。

背景技術

卵巢癌是死亡率居首位的女性生殖系統惡性腫瘤，腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性是臨床治療的主要障礙。運用鈷類耐藥標記蛋白，早期發現腫瘤耐藥，有助于臨床及時調整化療方案，改善患者預后。

卵巢癌患者對鉑類藥物藥的臨床評價標準包括：化療期腫瘤進展、停化療個月內腫瘤復發以及對一線化療的最好反應為可測量腫瘤無變化。這一標準的最大特點是直到化療進行到一定階段或腫瘤復發后，才能判斷出患者對于化療藥物的敏感性，從而使這部分患者在接受一線化療期間就進入耐藥。多年來，致力于臨床腫瘤治療學的研究者們一直期盼能在患者接受化療之前或治療初期預知腫瘤的耐藥性，以便及時調整化療方案，達到提高腫瘤緩解率、改善患者預后的目的，發現一種鉑類耐藥標記蛋白是解決這一問題的關鍵途徑。

由于Annexin A3定位于細胞漿和胞核，不存在信號肽和跨膜區域，其能否成為鉑類耐藥相關的標記蛋白取決于其能否被分泌到細胞外。而現有技術中，當樣品量較少的情況下，主要是采用ELISA方法來檢測Annexin A3蛋白在外周血中的表達的。但當樣本量較大的情況下，Annexin A3ELISA定量檢測試劑盒雖然實現了高通量檢測，但在經過嚴格的質控后，該試劑盒表現出敏感性欠佳、重復性差的突出問題，造成實驗數據的不穩定。研制一種能高通量、穩定檢測人外周血表達水平的免疫分析試劑盒成為亟待解決的關鍵問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，該檢測試劑盒精密性高。

本發明的上述目的是通過以下技術方案得以實現的：一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，包括包被有Annexin A3捕獲抗體的孔板、Annexin A3標準品S0～S5、濃度分別為1.6ng/mL和0.8ng/mL的質控品、辣根過氧化物酶標記的檢測抗體、化學發光底物液A、化學發光底物液B、濃縮洗漆液。

通過采用上述技術方案，不管樣品量是否較大，該種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒都能夠保證較高的靈敏性和準確度。

優選為，所述辣根過氧化物酶標記的檢測抗體的由以下步驟制得：a.HRP5mg溶于1.2mL0.2mol/L pH5.6醋酸鹽緩沖液中，加入0.1mol/LNaIO₄溶液0.5mL，2～8℃攪拌反應1小時；

b.加入0.8mol/L乙二醇0.2mL，2～8℃攪拌反應30分鐘；

c.將酶液裝入透析袋中，用0.001mol/L Ph4.2醋酸鹽緩沖液透析過夜；

d.取Annexin A3檢測抗體1mg，用pH9.5 1.0mol/L碳酸鹽緩沖液調pH至9.0～9.5，2～8℃攪拌反應3小時；

e.加入NaH₄B溶液使終濃度為1mg/mL，2～8℃攪拌反應1小時，Ph7.4 0.02mol/L磷酸鹽緩沖液透析過夜；

f.加等體積甘油，混勻后-20℃保存；

用酶標檢測抗體稀釋液將辣根過氧化物酶標記的檢測抗體稀釋為1∶250。

優選為，所述辣根過氧化物酶內加有含pH＝7.4HEPES緩沖液50mM，BSA 2.1～2.4g/L，MgSO₄ 11～13mM，NaCl1.2～1.8mM，ZnSO₄0.6～0.9mM，β-環糊精0.6～1.2g/L，海藻糖1.2～1.8g/L，甘油1.0～1.4g/L，十二烷基二甲基甜菜堿1.2～1.8g/L，防腐劑Proclin300 1.1～1.5g/L的穩定劑。

通過采用上述技術方案，穩定劑能夠長期保持酶的活性及辣根過氧化物酶偶聯物的空間構象，并且穩定性好，可顯著改善測試試劑盒的貨架壽命，提高其商業價值。

優選為，所述辣根過氧化物酶與穩定劑的重量比為1∶3～5。

通過采用上述技術方案，當穩定劑和辣根過氧化物酶的重量比值在4左右的時候，辣根過氧化物酶的保持就已經趨于最長，之后即使比值近一步增大，辣根過氧化物酶的保存時間也基本不會有較大的改變。所以，將穩定劑和辣根過氧化物酶的重量比值取至1∶3～5，這樣能夠減少穩定劑的用量，又能夠盡可能地延長辣根過氧化物酶的保存時間。

優選為，所述酶標檢測抗體稀釋液由200mL小牛血清加800mL 0.02mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液加1mL Proclin300，混勻后制成。