[發明專利]一種卵巢癌AnnexinA3檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710896299.7
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107831162A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 劉佐雄
• 申請（專利權）人: 北京儀諾益生科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：包括包被有Annexin A3捕獲抗體的孔板、Annexin A3標準品S0～S5、濃度分別為1.6ng/mL和0.8ng/mL的質控品、辣根過氧化物酶標記的檢測抗體、化學發光底物液A、化學發光底物液B、濃縮洗漆液。

2.根據權利要求1所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標記的檢測抗體的由以下步驟制得：a.HRP5mg溶于1.2mL0.2mol/L pH5.6醋酸鹽緩沖液中，加入0.1mol/LNaIO₄溶液0.5mL，2～8℃攪拌反應1小時；

b.加入0.8mol/L乙二醇0.2mL，2～8℃攪拌反應30分鐘；

c.將酶液裝入透析袋中，用0.001mol/L Ph4.2醋酸鹽緩沖液透析過夜；

d.取Annexin A3檢測抗體1mg，用pH9.51.0mol/L碳酸鹽緩沖液調pH至9.0～9.5，2～8℃攪拌反應3小時；

e.加入NaH₄B溶液使終濃度為1mg/mL，2～8℃攪拌反應1小時，Ph7.4 0.02mol/L磷酸鹽緩沖液透析過夜；

f.加等體積甘油，混勻后-20℃保存；

用酶標檢測抗體稀釋液將辣根過氧化物酶標記的檢測抗體稀釋為1∶250。

3.根據權利要求2所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶內加有含pH＝7.4HEPES緩沖液50mM，BSA2.1～2.4g/L，MgSO₄11～13mM，NaCl1.2～1.8mM，ZnSO₄0.6～0.9mM，β-環糊精0.6～1.2g/L，海藻糖1.2～1.8g/L，甘油1.0～1.4g/L，十二烷基二甲基甜菜堿1.2～1.8g/L，防腐劑Proclin3001.1～1.5g/L的穩定劑。

4.根據權利要求3所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶與穩定劑的重量比為1∶3～5。

5.根據權利要求2所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述酶標檢測抗體稀釋液由200mL小牛血清加800mL 0.02mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液加1mL Proclin300，混勻后制成。

6.根據權利要求1所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述Annexin A3標準品S0～S5分別為純的標準品稀釋液以及將人Annexin A3重組蛋白溶液用標準品稀釋液稀釋配成0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.8ng/mL、1.6ng/mL。

7.根據權利要求6所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述標準品稀釋液由稱取10gBSA加入1000mL 0.02mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液中溶解，加入1mLProclin300，混勻后制成。

8.根據權利要求1所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述化學發光底物液A由稱取Tris 6.057g，加500mL去離子水溶解，加入濃HCL3.808mL，30％過氧化氫0.675mL，用去離子水定容至1000mL制成，所述化學發光底物液B由稱取Tris 6.057g，加500mL去離子水溶解，加入濃HCL1.033mL，加入魯米諾708.8mg，用去離子水定容至1000mL制成。

9.根據權利要求1所述的一種卵巢癌Annexin A3檢測試劑盒，其特征在于：所述濃縮洗滌液由稱取Na₂HPO₄·12H₂O 14.506g，NaH₂PO₄·12H₂O1.482g，NaCl 150g，加去離子水1000mL溶解，加Tween-20 10mL、Proclin300 1mL，使用前用去離子水1∶20稀釋。