[發明專利]特異性示蹤內皮細胞分化的hESC指示細胞系的構建方法有效
| 申請號： | 201710894222.6 | 申請日： | 2017-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN107805627B | 公開（公告）日： | 2020-11-06 |
| 發明（設計）人： | 梁德生;胡志青;鄔玲仟 | 申請（專利權）人： | 中南大學 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113 | 代理人： | 盧宏;周棟 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 特異性 內皮 細胞 分化 hesc 指示 細胞系 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.特異性示蹤內皮細胞分化的hESC指示細胞系的構建方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
(1)構建質粒CD144N-GFP，所述質粒CD144N-GFP的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示；
(2)構建質粒TALENs，所述質粒TALENs包括質粒CD144N-L2和質粒CD144N-R2，所述質粒CD144N-L2的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示，所述質粒CD144N-R2的核苷酸序列如SEQ IDNO .3所示；
(3)將質粒CD144N-GFP和質粒TALENs同時核轉ESCs，經過G418篩選，挑取單克隆之后，利用跨5’同源臂引物F1/R1及跨3’同源臂引物F2/R2進行PCR初步鑒定，鑒定雙側陽性者進行Southern blot鑒定，利用Kpn I酶切，長同源臂上探針進行雜交鑒定，陽性者即為特異性示蹤內皮細胞分化的hESC指示細胞系；其中，所述跨5’同源臂引物F1的核苷酸序列如SEQIDNO .4所示，所述跨5’同源臂引物R1的核苷酸序列如SEQ ID NO .5所示，所述跨3’同源臂引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO .6所示，所述跨3’同源臂引物R2的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示；
所述步驟（1）構建質粒CD144N-GFP為在CD144起始密碼子處插入報告基因編碼序列；
所述hESC為H9細胞系。
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