[發明專利]一種雙酚A熒光檢測試紙條、制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710894094.5
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN108196048A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 張慧;姜侃;厲永綱;胡小芳;陳小珍
• 申請（專利權）人: 浙江省產品質量安全檢測研究院;杭州創新生物檢控技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

1.一種雙酚A熒光檢測試紙條，其特征在于，所述雙酚A熒光檢測試紙條包括在襯板上依次粘貼搭接的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊；所述結合墊為熒光納米微球-適配體①結合墊，所述硝酸纖維膜上間隔布置有檢測標記和參照標記，所述檢測標記包含以鏈霉親和素-生物素-適配體②在硝酸纖維膜上印制的檢測線，所述參照標記包含以鏈霉親和素-生物素-適配體③在硝酸纖維膜上印制的參照線，所述檢測線與參照線平行布置且檢測線靠近樣品墊。

2.根據權利要求1所述的雙酚A熒光檢測試紙條，其特征在于，適配體①、適配體②和適配體③的核苷酸序列依次為：

適配體①：5’-CCG GTG GGT GGT CAG GTG GGA TAG CGT TCC GCG TAT GGC CCA GCGCAT CAC GGG TTC GCA CCA AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-NH₂-3’；

適配體②：5’-TGG TGC GAA CCC GTG ATG CGC TGG GCC ATA CGC GGA ACG CTA TCCCAC CTG ACC ACC CAC CGG-Biotin-3’；

適配體③：5’-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’。

3.根據權利要求1所述的雙酚A熒光檢測試紙條，其特征在于，所述結合墊為：熒光納米微球與氨基修飾的適配體①按照質量比為1:10在37℃下反應1.5小時得到熒光納米微球-適配體①，將熒光納米微球-適配體①均勻地涂抹在玻璃纖維膜上，凍干后形成熒光納米微球-適配體①結合墊。

4.根據權利要求1所述的雙酚A熒光檢測試紙條，其特征在于，所述檢測線為：生物素修飾適配體②與鏈霉親和素按照摩爾比為1:10在37℃下反應30min得到鏈霉親和素-生物素-適配體②，在硝酸纖維素膜上用鏈霉親和素-生物素-適配體②溶液劃線得到包含鏈霉親和素-生物素-適配體②的線為檢測線；

所述參照線為：生物素修飾適配體③與鏈霉親和素按照摩爾比為1:10在37℃下反應30min得到鏈霉親和素-生物素-適配體③，在硝酸纖維素膜上用鏈霉親和素-生物素-適配體③溶液劃線得到包含鏈霉親和素-生物素-適配體③的線為參照線。

5.一種雙酚A熒光檢測試紙條的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)熒光納米微球與氨基修飾的適配體①按照質量比為1:10在37℃下反應1.5小時，得到熒光納米微球-適配體①；將熒光納米微球-適配體①均勻地涂抹在玻璃纖維膜上，凍干后形成熒光納米微球-適配體①結合墊；

(2)生物素修飾的適配體②和生物素修飾的適配體③分別與鏈霉親和素按照摩爾比為1:10在37℃下反應30min，得到鏈霉親和素-生物素-適配體②和鏈霉親和素-生物素-適配體③；在硝酸纖維膜上用鏈霉親和素-生物素-適配體②和鏈霉親和素-生物素-適配體③的溶液分別劃兩條平行的線，包含鏈霉親和素-生物素-適配體②的線為檢測線，包含鏈霉親和素-生物素-適配體③的線為參照線；

(3)在襯板上依次粘貼搭接樣品墊、熒光納米微球-適配體①結合墊、包含鏈霉親和素-生物素-適配體②的檢測線和包含鏈霉親和素-生物素-適配體③的參照線的硝酸纖維素膜以及吸收墊；相鄰兩粘貼物之間的重疊部分長度為2mm，得到的熒光檢測試紙條干燥封裝并在4～25℃下保存。

6.一種雙酚A熒光檢測試紙條的應用，其特征在于，所述雙酚A熒光檢測試紙條的應用基于權利要求1-4中任意一項所述的雙酚A熒光檢測試紙條，所述雙酚A熒光檢測試紙條的應用包括：將雙酚A熒光檢測試紙條的吸收墊端插入至待檢測的樣品中，待檢測的樣品溶液高度不要超過樣品墊，同時設置一組空白對照組，等待30s后取出平放20min，在紫外燈下用肉眼觀察檢測結果；

如果硝酸纖維素膜上的檢測線和參照線同時顯熒光，且檢測線熒光信號強度強于或與參照線相當，則表明檢測樣品中雙酚A含量低于10ppb，檢測結果為陰性；

如果硝酸纖維素膜上的檢測線和參照線同時顯熒光，且檢測線熒光信號強度淺于參照線，則表明樣品中雙酚A含量超過10ppb，檢測結果為陽性；

如果硝酸纖維素膜上的檢測線顯熒光、參照線不顯熒光，檢測結果無效。