[發明專利]一種雙酚A熒光檢測試紙條、制備方法及應用

在審

• 申請號: 201710894094.5
• 申請日: 2017-09-28
• 公開（公告）號: CN108196048A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 張慧;姜侃;厲永綱;胡小芳;陳小珍
• 申請（專利權）人: 浙江省產品質量安全檢測研究院;杭州創新生物檢控技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

本發明公開了一種雙酚A熒光檢測試紙條、制備方法及應用，雙酚A熒光檢測試紙條包括在襯板上依次粘貼搭接的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊；所述結合墊為熒光納米微球?適配體①結合墊，所述硝酸纖維膜上間隔布置有檢測標記和參照標記，所述檢測標記包含以鏈霉親和素?生物素?適配體②在硝酸纖維膜上印制的檢測線，所述參照標記包含以鏈霉親和素?生物素?適配體③在硝酸纖維膜上印制的參照線，所述檢測線與參照線平行布置且檢測線靠近樣品墊。本發明采用競爭法的原理，通過試紙條上檢測線和參照線的顯色程度來檢測待測樣品中雙酚A的含量，檢測快速、準確，30min內即可以完成檢測，適用于企業或者政府監管部門的現場快速檢測。

技術領域

本發明屬于熒光檢測技術領域，尤其是涉及一種雙酚A熒光檢測試紙條、制備方法及應用。

背景技術

雙酚A是一種環境內分泌干擾物質，由于其明確的食品安全風險，近年來備受關注。雙酚A具有類似雌激素的作用，通過一些途徑如污染水源、食物或經皮膚吸收進入機體后，可以干擾身體內分泌激素的合成、釋放和代謝等，從而使機體內分泌失調，出現性早熟等疾病。雙酚A作為塑料包裝的合成原料，與復雜基質食品密切、長時間接觸過程中可能發生遷移，從而帶來潛在的食品安全隱患。

雙酚A的測定主要有高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯質譜法等精密儀器檢測的方法，檢測成本較高；其酶聯免疫法操作簡單，檢測快速，但是生物抗體制備繁瑣耗時。

核酸適配體是近年來發展起來的一類新型生物識別分子，是通過體外篩選得到的一組能與靶分子如蛋白質、有機物或金屬離子等高親和、高特異性結合的寡核苷酸序列(DNA或RNA)。由于其具有分子量較小、可化學合成、穩定性好等優點受到了研究者的廣泛關注。開發基于核酸適配體的快速檢測試紙條為快速檢測方法的研究提供了新思路。

發明內容

本發明的第一個目的在于，針對現有技術中存在的不足，提供一種雙酚A熒光檢測試紙條。

為此，本發明的上述目的通過以下技術方案來實現：

一種雙酚A熒光檢測試紙條，所述雙酚A熒光檢測試紙條包括在襯板上依次粘貼搭接的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊；所述結合墊為熒光納米微球-適配體①結合墊，所述硝酸纖維膜上間隔布置有檢測標記和參照標記，所述檢測標記包含以鏈霉親和素-生物素-適配體②在硝酸纖維膜上印制的檢測線，所述參照標記包含以鏈霉親和素-生物素-適配體③在硝酸纖維膜上印制的參照線，所述檢測線與參照線平行布置且檢測線靠近樣品墊。

為了取得進一步的技術效果，本發明還可以采用以下進一步的技術方案：

優選地，適配體①、適配體②和適配體③的核苷酸序列依次為：

適配體①：5’-CCG GTG GGT GGT CAG GTG GGA TAG CGT TCC GCG TAT GGC CCAGCG CAT CAC GGG TTC GCA CCA AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-NH₂-3’；

適配體②：5’-TGG TGC GAA CCC GTG ATG CGC TGG GCC ATA CGC GGA ACG CTATCC CAC CTG ACC ACC CAC CGG-Biotin-3’；

適配體③：5’-Biotin-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’。

優選地，所述結合墊為：熒光納米微球與氨基修飾的適配體①按照質量比為1:10在37℃下反應1.5小時得到熒光納米微球-適配體①，將熒光納米微球-適配體①均勻地涂抹在玻璃纖維膜上，凍干后形成熒光納米微球-適配體①結合墊。