[發明專利]可誘導分泌抗CD47抗體的工程化免疫細胞

在審

• 申請號: 201710891841.X
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN109554348A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 劉麗萍;曹衛;馬安云;何佳平
• 申請（專利權）人: 亙喜生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;鄭震

1.一種工程化的免疫細胞，其特征在于，所述工程化的免疫細胞為T細胞或NK細胞，并且所述的免疫細胞細胞具有以下特征：

(a)所述免疫細胞表達嵌合抗原受體CAR或外源TCR，所述CAR靶向腫瘤細胞的標志物，所述外源TCR靶向腫瘤細胞的標志物；和

(b)當所述CAR被激活和/或所述外源TCR被激活時，所述免疫細胞誘導分泌抗CD47抗體。

2.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述的工程化的免疫細胞選自下組：

(i)嵌合抗原受體T細胞(CAR-T細胞)；

(ii)嵌合抗原受體NK細胞(CAR-NK細胞)；或

(iii)外源T細胞受體(TCR)T細胞(TCR-T細胞)。

3.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述CAR的結構如式I所示：

L1-scFv-H1-TM-C-CD3ζ (I)

式中，

L1為無或信號肽序列；

scFv為抗原結合結構域；

H1為無或鉸鏈區；

TM為跨膜結構域；

C為共刺激信號分子；

CD3ζ為源于CD3ζ的胞漿信號傳導序列；

所述“-”連接肽或肽鍵。

4.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述抗CD47抗體為抗CD47scFv，所述抗CD47scFv的結構如下式II所示：

L2-VH-X-VL-H2-G (II)

其中，

L2為無或信號肽序列；

VH為抗CD47抗體的重鏈可變區；

X為無或連接肽；

VL為抗CD47抗體的輕鏈可變區；

H2為無或免疫球蛋白的鉸鏈區；

G為無或Fc片段。

5.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述抗CD47scFv的氨基酸序列如SEQ IDNO.:2或SEQ ID NO.:4所示。

6.一種制備權利要求1所述的工程化的免疫細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(A)提供一待改造的免疫細胞；和

(B)對所述的免疫細胞進行改造，從而使得所述的免疫細胞表達所述的CAR或外源TCR，且在所述CAR被激活和/或所述外源TCR被激活時，所述免疫細胞誘導分泌抗CD47抗體，從而獲得權利要求1所述的工程化的免疫細胞。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(B)中，包括(B1)將表達所述CAR或外源TCR的第一表達盒導入所述免疫細胞；和(B2)將可誘導分泌抗CD47抗體的第二表達盒導入所述免疫細胞；所述的步驟(B1)可在步驟(B2)之前、之后、同時、或交替進行；其中，

所述第二表達盒從5’-3’具有式III結構：

Z1-Z2 (III)

式中，

各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

Z1為誘導型啟動子；

Z2為編碼抗CD47抗體的核酸序列。

8.一種制劑，其特征在于，所述制劑含有權利要求1所述的工程化的免疫細胞，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

9.如權利要求1所述的工程化的免疫細胞的用途，其特征在于，用于制備預防和/或治療癌癥或腫瘤的藥物或制劑。

10.一種用于制備權利要求1所述的工程化的免疫細胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有容器，以及位于容器內的：

(1)第一核酸序列，所述第一核酸序列含有用于表達所述CAR或外源TCR的第一表達盒；和

(2)第二核酸序列，所述第二核酸序列含有用于可誘導分泌抗CD47抗體的第二表達盒。