[發(fā)明專(zhuān)利]一種蛋白酶酶解法制備蛋白肽的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710890096.7
• 申請(qǐng)日: 2017-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107586819B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁璞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 舟山市常青海洋食品有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 吳輝輝

一種蛋白酶酶解制備蛋白肽的方法，涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，包括以下步驟：先將底物蛋白調(diào)節(jié)pH至6.5～7.5，然后加入風(fēng)味蛋白酶、維生素B1、川穹，攪拌進(jìn)行酶解反應(yīng)得蛋白肽；本發(fā)明的一種蛋白酶酶解制備蛋白肽的方法中，選用風(fēng)味蛋白酶，并加入維生素B1和川穹，能夠激活風(fēng)味蛋白酶的酶活性，增強(qiáng)對(duì)蛋白質(zhì)的酶解作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種蛋白酶酶解法制備蛋白肽。

背景技術(shù)

蛋白肽是一種生物活性物質(zhì)，是蛋白經(jīng)蛋白酶水解或微生物發(fā)酵等方法所制得的具有某些生物學(xué)功能的混合低聚肽。從化學(xué)角度上講，蛋白肽則是蛋白質(zhì)中20個(gè)天然氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的從二肽到復(fù)雜的線性、環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肽類(lèi)的總稱(chēng)。蛋白肽具有多種機(jī)體代謝和生理調(diào)節(jié)功能，以消化吸收。它還有降血糖、降血脂、舒張血管、促進(jìn)骨的合成代謝保持其正常結(jié)構(gòu)功能、促生長(zhǎng)、促細(xì)胞分化、創(chuàng)傷修復(fù)的功能。

水產(chǎn)品的蛋白肽的制備加工主要有溶劑提取法、微生物發(fā)酵法、合成法和酶解法。溶劑提取法是利用溶劑對(duì)多肽的溶解性不同從而提取出來(lái)的一種方法，這種方法和萃取方法很相似，這種方法適用于的生物體內(nèi)的游離的多肽利用溶劑提取出來(lái)，提取過(guò)程會(huì)用用到一些特殊的手段。海洋生物中的多種活性的多肽存在于水產(chǎn)品的不同部分例如骨骼、肌肉中等各個(gè)部分，由于海洋生物中的游離出來(lái)的多肽含量較少。與此同時(shí)，利用溶劑提取法從水產(chǎn)品中提取的活性肽的純度不高，要提高純度，需要經(jīng)過(guò)許多步驟，這些步驟會(huì)導(dǎo)致有毒物質(zhì)的引進(jìn)，還會(huì)對(duì)活性肽造成污染，有一些有機(jī)溶劑還會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，并產(chǎn)生有毒物質(zhì)殘留等問(wèn)題。溶劑提取法的步驟繁多，并且提取率不高，得到多肽的純度也不高，通過(guò)這種方法提取多肽會(huì)造成水產(chǎn)品的大量浪費(fèi)，同時(shí)對(duì)海洋環(huán)境也造成很大的破壞。所以利用溶劑提取法從水產(chǎn)品中提取生理功能的多肽，主要用于提取多肽的比較基礎(chǔ)的步驟，還要進(jìn)行進(jìn)一步的精深加工。

第二種方法是微生物發(fā)酵法。微生物發(fā)酵法是指利用能夠蛋白質(zhì)生長(zhǎng)的微生物進(jìn)行發(fā)酵，這些微生物包括放線菌、霉菌、細(xì)菌等，在適宜的溫度、pH值的條件下，并且接種量是一定的，經(jīng)過(guò)微生物的代謝將蛋白進(jìn)行體內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生特定的多肽，作用于大分子蛋白質(zhì)將其發(fā)酵降解變成了肽鏈長(zhǎng)短不一的多肽混合物，再利用一些分離和純化的手段將多肽混合分離。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是大大縮短了生物自身體內(nèi)產(chǎn)生多肽的反應(yīng)時(shí)間，降低了生產(chǎn)成本，同時(shí)提高了產(chǎn)量，使多肽中的有毒物質(zhì)也減少了很多，對(duì)人體更加安全。但是微生物發(fā)酵過(guò)程中的會(huì)產(chǎn)生很多副產(chǎn)物，有些會(huì)減緩甚至抑制發(fā)酵過(guò)程中的中間產(chǎn)物和最終的的多肽的產(chǎn)生，經(jīng)過(guò)微生物生長(zhǎng)代謝的蛋白質(zhì)，分解值后的產(chǎn)物很難控制，并且將這些多肽混合物分離純化出來(lái)的工作量大，消耗時(shí)間長(zhǎng)。所以微生物發(fā)酵方法要應(yīng)用的到大規(guī)模的企業(yè)生產(chǎn)中還有很多問(wèn)題需要克服。

第三種方法是化學(xué)合成法，化學(xué)合成法是現(xiàn)在應(yīng)用比較廣泛的一種生產(chǎn)具有生理活性的多肽的方法，化學(xué)合成法是從水產(chǎn)品中通過(guò)一系列的試驗(yàn)方法得到的微量的，并且已經(jīng)有十分準(zhǔn)確的氨基酸殘疾的序列的的多肽，這樣的多肽才能夠采用這種方法，這種方法能夠有效的合成具有相同氨基酸殘基序列多肽。但是這種方法缺點(diǎn)也造成生產(chǎn)成本太高，難以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的生產(chǎn)，在氨基酸合成過(guò)程中會(huì)使用有機(jī)溶劑進(jìn)行反應(yīng)，對(duì)人體造成一定的損傷，與此同時(shí)，在合成多肽的過(guò)程中會(huì)有很多副反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)產(chǎn)生了很多副產(chǎn)物，造成了不必要的損失，這使得化學(xué)合成多肽的方法受到不同程度的阻礙。

第四種方法是蛋白酶酶解法，蛋白酶酶解法利用蛋白酶的剪切力對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分割，這種方法也是水解蛋白質(zhì)用來(lái)制備多肽的一種十分常用的方法，蛋白酶酶解的過(guò)程中，只要保持比較穩(wěn)定的反應(yīng)的溫度，反應(yīng)條件比較溫和，只要利用酶的專(zhuān)一性就可以剪切出反應(yīng)終產(chǎn)物，使終產(chǎn)物活性比較穩(wěn)定。在酶解過(guò)程中要保持者相對(duì)穩(wěn)定的酶解溫度和pH值，同時(shí)酶解時(shí)間、料液比和加酶量也要有所控制。在酶解時(shí)，酶的選擇也是十分重要的，不同種蛋白酶對(duì)剪切位點(diǎn)不同，反應(yīng)條件也不同。因此，急需開(kāi)發(fā)一種能在限定條件下快速穩(wěn)定進(jìn)行酶解作用的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，提出了一種蛋白酶酶解制備蛋白肽的方法。