[發明專利]半固體篩選培養基及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710888365.6
• 申請日: 2017-09-27
• 公開（公告）號: CN107764789A
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 尹杰
• 申請（專利權）人: 成都微康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所11308
• 代理人: 黎昌莉

1.半固體篩選培養基，其特征在于，包括如下體積份數的組分：

2.根據權利要求1所述的半固體篩選培養基，其特征在于，所述Eu3+微球標記的抗原溶液中Eu3+微球與抗原的質量比為0.02～1：1。

3.根據權利要求1所述的半固體篩選培養基，其特征在于，包括如下體積份數的組分：

4.根據權利要求1所述的半固體篩選培養基，其特征在于，所述甲基纖維素半固體培養基由按照體積比為1：1的2×DMEM培養基和4％的甲基纖維溶液充分混勻得到。

5.權利1-4任一項所述的半固體篩選培養基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)按上述體積比配置甲基纖維素半固體培養基；

2)按上述體積比將50×HAT溶液、胎牛血清、100×青霉素和鏈霉素的雙抗溶液、1000×EGF溶液、1000×IL-6溶液混合均勻、100×B細胞刺激因子溶液和100×Eu3+微球標記的抗原溶液混合均勻，得混合物；

3)將步驟1所述甲基纖維素半固體培養基與步驟2)所述混合物混合均勻得半固體篩選培養基。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟2)混合的溫度為4℃，混合的時間為6～24h；步驟3)中混合的溫度為4℃。

7.權利1-4任一項所述的半固體篩選培養基在抗原抗體檢測中的應用。

8.利用權利1-4任一項所述的半固體篩選培養基篩選雜交瘤細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將淋巴細胞和小鼠骨髓瘤進行細胞融合后，用HAT液體培養基將融合后的細胞重懸得到細胞懸液；

2)將步驟1)所述細胞懸液加到預熱至35℃～38℃的半固體篩選培養基中混勻，靜置并排除氣泡后倒入平皿中，置于孵育箱中培養；

3)步驟2)中平皿長出肉眼可見克隆集落時，時間分辨熒光儀下，用365nm波長的激發光激發，在200-300ms后用615nm波長下觀察，有紅色熒光的即為分泌針對目標抗原抗體的陽性克隆，并做好標記；

4)將步驟3)已標記的陽性克隆挑出，所述陽性克隆即為雜交瘤細胞。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述HAT液體培養基由如下成分組成：1×DMEM培養基、20％的胎牛血清和1×HAT。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述篩選方法還包括步驟：

5)對步驟4)挑出的已標記的陽性克隆的確認：將挑出的陽性克隆放入含有HT液體培養基的96孔板中進行培養，每孔一個克隆，待細胞長滿孔底后，取上清對陽性克隆進行確認。